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フローサイトメトリーの免疫染色について 削除/引用 No.6012-3 - 2017/06/02 (金) 13:31:53 - sora emaさん 早々にご意見をありがとうございました。 抽出液にダイレクトにソートする件、大変参考になりました。 遺伝子解析は外注する予定ですが、RNAlater浸漬が条件ですのでこれに直接ソートすればいいですね。 免疫染色の件ですが、実は予備実験でFACS解析したところ（組織から細胞をとっています）、生存率が悪かったので（7AADで染色しました)、免疫染色の過程で1回でもスピンダウンなどの操作を回避したほうがいいのかなと思った次第です。免疫染色過程で死んでいく細胞ってどれくらいなんでしょうか？手技次第でしょうか。何かコツがあったら是非教えてください。 よろしくお願いします。

どちらでも 削除/引用 No.6012-2 - 2017/06/02 (金) 10:56:36 - ema 抗体によっては１次抗体直接蛍光で良い染色にならないことは私もありましたのでsoraさんに同意します。 >活きのいい細胞をとりたい のが目的なら、１次抗体につけようが２次抗体につけようが、PI染色のゲートを行えば良いのでは。 それよりも、ソート先は培地とかPBSで細胞スピンダウンなどのステップをいれるより、Trizol-LSか何か抽出液にダイレクトにソートした方が活きがいいと思います。

フローサイトメトリーの免疫染色について 削除/引用 No.6012-1 - 2017/06/01 (木) 20:35:31 - sora いつも参考にさせて頂いています。 フローサイトである集団の細胞を採取して、genechip アレイを行う予定です。 細胞の選別のために免疫染色を行のですが、一次抗体に直接蛍光色素をラベルする方法、蛍光標識二次抗体を使う方法のどちらかで迷っています。 ソートした後のRNA回収を考えると活きのいい細胞をとりたいと思いますので、一次抗体に蛍光ラベルすべきとは思いますが、この手のラベリングキットで今まであまり効率よくラベルされた経験がありません（昔の話ですが）。 どちらの方法が良いか、経験されている方、ご意見や情報を頂ければ幸いです。 よろしくお願いします。

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