全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

固定方法 削除/引用 No.5998-5 - 2017/06/04 (日) 14:45:49 - 駆け出し大学院生 因みにFACS解析用細胞の固定は4%PFAでしょうか？？染色後だったらいいですが、染色後だったら固定による影響が確かに気になりますね。。。

御礼 削除/引用 No.5998-4 - 2017/06/04 (日) 14:44:22 - 駆け出し大学院生 有難う御座います。 今後、追加で解析する抗原が出た場合を考慮してのことでした。 あまり、FACS解析用に細胞の凍結による保存は一般的ではないようですね。Bossにも、あまりしない方がいいのでは進言されました。。。 しかし気になりますので一度、Xさんの言う通り、凍結した細胞で解析をして、新鮮細胞との比較をしてみます。

(無題) 削除/引用 No.5998-3 - 2017/05/28 (日) 06:03:10 - X 私自身は、一回凍結した細胞を解凍してFACS用の抗体染色するのはちょっと抵抗があるのでやりませんが、どうしても必要であれば、一回、サンプルを二つに分けて、直接染色した場合と、一回凍結した場合で、どれくらい差があるか見てみると良いと思います。その差が許容範囲内と判断されれば、凍結しても良いかもしれませんが、その場合は、すべてのサンプルを同一の処理法（凍結するなら、今後すべてのサンプルを凍結する）で解析する方が無難と思います。 私だったら、前の方と同様、凍結ではなく固定する方を選ぶと思いますが、できれば頑張って抗体染色まではやってから固定し、FACS解析だけ後回しにします。一回固定すると、抗体によっては染色性がかなり変わるので、無染色で固定する場合は、上記と同様、一回サンプルを分けて、前固定した場合どれくらい染色が変わるか見てから判断します。抗体によっては、固定しても大丈夫かもしれませんので、ケースバイケースになると思います。

(無題) 削除/引用 No.5998-2 - 2017/05/25 (木) 23:56:32 - ふ 普通は細胞を染色後に固定をして、そのまま4度にぶち込んだ後、翌日解析というのがよくやられることだと思います。

FACS用の細胞保存 削除/引用 No.5998-1 - 2017/05/25 (木) 23:27:49 - 駆け出し大学院生 手術検体の組織をcell dissociation bufferなどで、細胞単位にばらばらにして、FACSで細胞表面抗原の発現を解析しています。 中々時間や試薬の関係上、後で又解析したいということもありまして。。。 細胞液を、cell bankerなどで、凍結保存したものを、その後、FACSの解析に用いることは、実験上、問題ないでしょうか？？どのような問題が生じる可能性がありますでしょうか？ （細胞の生存率は低くなると思いますが、死細胞除去などで対応したとして） 細胞表面抗原にも、影響を及ぼす可能性もあると思いますが、、、 このようにして解析をされている方、いらっしゃいますでしょうか？？

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---