全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.5989-2 - 2017/05/23 (火) 18:42:26 - qq ＞�@リフォールディング前の還元処理の確認 どのくらい本気で還元処理を確認したいのかによりますが、 １）尿素抽出だそうだから、そこにSDSを添加して、そのままSDS-PAGEに用いる。還元処理が効果あれば、タンパクの泳動距離やシャープさが変わりますから、視覚的に確認できるかもしれません。それで十分ではないでしょうか？ ２）還元して生じたSH基をDTNBなどで定量する方法はありますが、かなり大変かもしれません。 ＞可溶性ならばプロテアーゼ処理を行って分解産物のSDS-PAGE結果から判断 プロテアーゼで確認する方法は、おそらくネイティブなタンパク質のSS結合を確認する方法でしょうから、間違ったSS結合もとっていそうな変性タンパク質の確認には不適切だと思います。 ＞　条件はタンパク質個別にあるので，数をこなしていくしかないと思います そうだろうと思います。尿素で変性溶解したタンパク質に（あれば）特異的なリガンドを添加して、透析すると上手く行くこともあります。

不溶性画分の還元・リフォールディングについて　調べ方について 削除/引用 No.5989-1 - 2017/05/23 (火) 16:24:23 - 大腸菌の発現 大腸菌に発現させ 不溶性画分（尿素で可溶化）に発現したタンパク（ジスルフィド結合もち）の リフォールディング条件（段階透析法）を調べています。 ここで困った時があります。 �@リフォールディング前の還元処理の確認 　還元できたかをどうやって確認するのか？ 　可溶性ならばプロテアーゼ処理を行って分解産物のSDS-PAGE結果から判断できますが，この手法は不溶性の場合でも可能なのか？ �A条件検討のしぼり方 　条件はタンパク質個別にあるので，数をこなしていくしかないと思いますが， 　そうはいっても可能な実験数は限られます。 　条件は何からしぼっていけばいいでしょうか？　 　目的のタンパクと同じファミリーに属するタンパクでの条件ではうまくいってません

全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---