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ヒストンの糖修飾
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No.5988-TOPIC - 2017/05/23 (火) 13:00:11 - 質問をします。
この前ヒストンの糖修飾を調べようとおもい抗O-GlcNAc 抗体を買ってもらい核蛋白質画分を酸沈殿した遠心上清をあつめて有機溶媒で濃縮したものをウェスタンブロットをしたのですがヒストンはたくさんとれてたにもかかわらず何回かやってもO-glucNAc抗体のシグナルが検出できないのですが実際に検出出来た方いましたら抗体のメーカーと注意点とかおしえてください。
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No.5988-4 - 2017/05/24 (水) 03:54:27 - Tom
O-GlcNAc抗体を含む、糖鎖を認識する抗体は条件をしっかり決めないとうまく出てくれません。
特にブロッキングはBSAかスキムミルクかや、抗体の希釈バッファーは何かは重要です。いきなり核抽出物をやるのではなく、まず抗体反応の条件決めにはシンプルな実験で、OGA阻害剤有無の2サンプルでやるといいですよ。
(無題)
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No.5988-3 - 2017/05/23 (火) 20:12:17 - 質問をします。
original paperは読んでませんが、HistoneのGlcNAc修飾は転写とか生理的にも重要な働きをしているそうで、だいぶ前から総説とかいろいろなところで取り上げられているのであるとおもいます。
(無題)
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No.5988-2 - 2017/05/23 (火) 14:46:48 - おお
修飾されているという先行研究はありますか?
ヒストンの糖修飾
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No.5988-1 - 2017/05/23 (火) 13:00:11 - 質問をします。
この前ヒストンの糖修飾を調べようとおもい抗O-GlcNAc 抗体を買ってもらい核蛋白質画分を酸沈殿した遠心上清をあつめて有機溶媒で濃縮したものをウェスタンブロットをしたのですがヒストンはたくさんとれてたにもかかわらず何回かやってもO-glucNAc抗体のシグナルが検出できないのですが実際に検出出来た方いましたら抗体のメーカーと注意点とかおしえてください。
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