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(無題) 削除/引用 No.5960-3 - 2017/05/05 (金) 03:21:20 - おお YKさんじょうほうありがとうごさいました。感覚としてどれくらいの希釈でコントロールがバックグランドレベルになるかという感触はございますか？検出は蛍光でしたでしょうか発色でしょうか？

(無題) 削除/引用 No.5960-2 - 2017/05/05 (金) 00:28:45 - YK おおさん、 いつもお世話になっております。 自分の経験で恐縮ですが、私はマウスにグルコサミン+LPSの同時投与による肝障害モデルを使った実験を行なっていたことがあります。サンプルは血清で、測定はプロメガのLDHキットを用いていました。 血清ではバックは高くなるとは思います。 なので、私は最も重症なマウス血清を段階的に希釈し、バックグラウンドと比較して明確な差が現れる希釈倍率をまず求めた上で、未投与マウス血清をエンロールして適切な希釈倍率で希釈した血清を最終的に測定していました。 この実験系では、コントロールのLDH活性は検出限界以下でしたが、肝障害モデルマウスで100-1000倍ほどの差が現れました。

cytotoxic assay using LDH 削除/引用 No.5960-1 - 2017/05/04 (木) 15:57:59 - おお 大昔にはCr５１（５１だったかな）のリリースをつかって細胞傷害性を測定していたようですが、RIを使わないほうほうとしてLDHのリリースを測る方法が考案されポピュラーになってきています。しかしながらLDHは血清中に含まれていることもあるようで、ロットによっては高いバックグランドが出るという話もあります。また最近はLDHの活性を蛍光で見るという方法もキット化されて検出感度も上がってきたんじゃないかなと想像しています。 で実際に血清でどの程度からどの程度まで影響受けるのかなど経験など伺えたらと思います。プラクティカルな要素も含めて実際のELISAリーダーのブランクに対する値とか聞けると嬉しいかなと思っています。 またあまりポピュラーではないのですが血清を非動化（Heat inactivation)するといいという事を言う人もいますが、実際の経験のもとに行っているのか、思いつきで良さそうだということなのかイマイチわかりません。非動化したらバックグランドがかなり下がったとか経験がある方いらっしゃいましたら、コメントいただけるとうれしいです。

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