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自作カラム 削除/引用 No.5953-8 - 2017/05/01 (月) 19:32:35 - apes qq 様 アドバイスありがとうございます。 さほどの微量ではありませんので、お教えいただいたフィルターを 試してみます。 mon 様 検証するバリエーションが多いので、培地に直接レジンを 入れようと考えていました。検討いたします。 ご意見ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.5953-7 - 2017/05/01 (月) 14:45:13 - mon なお、ペリプラズム抽出液の場合は問題ないです。

(無題) 削除/引用 No.5953-6 - 2017/05/01 (月) 14:44:08 - mon 質問とは直接関係ないですが、培地成分（アミノ酸）によりNiカラムへのHisタグタンパクの結合が阻害されますので、予備的検討を行ってください。NiカラムからNiが外れるときもあります。 培養上清が多い場合は硫安沈殿等（または、pH6程度に調整してHisTagを利用した陽イオン交換カラムでのバッチ処理など）で前処理が必要です。

(無題) 削除/引用 No.5953-5 - 2017/05/01 (月) 14:34:05 - qq 大腸菌抽出液をロードするのでしょうから、その時点で吸着・ブロッキングができていると思います。 超微量タンパク質を扱っているのでなければ、吸着のロスを問題視する必要はないだろうと思います。

自作カラム 削除/引用 No.5953-4 - 2017/05/01 (月) 13:35:59 - apes 編集途中で送信してしまいました。申し訳ありません。 qq 様、早速のご返信ありがとうございました。 Whatman GF/Dフィルタを利用されているとのことですが、 フィルタのタンパク質の吸着は特に問題ありませんでしょうか。

自作カラム 削除/引用 No.5953-3 - 2017/05/01 (月) 13:31:20 - apes

(無題) 削除/引用 No.5953-2 - 2017/05/01 (月) 11:33:42 - qq >注射筒を利用する場合は、先端に詰めるもの（フリット？）は >何を利用すべきでしょうか。 Whatman GF/Dフィルタを使っています。注射筒をフィルタに強く押し当てて、押し当てた輪郭に沿って丸く抜き出して使います。

自作カラム 削除/引用 No.5953-1 - 2017/05/01 (月) 10:57:03 - apes いつも参考にさせていただいております。 大腸菌を用いてHis-tagを付加した組換えタンパク質を発現分泌させ、 培養液からNi-NTAのレジンを利用してバッチ法で回収したいと 考えています。最終的にレジンをカラムに回収し、洗浄、溶出を 行いたいのですが、数・回数が多くなりそうで、エンプティーカラムを 購入して利用するのにお金が結構掛かってしまいます。 以前、イオン交換樹脂を注射筒に詰めてカラムとして利用していましたが、 Ni-NTAレジンでも同様のことが可能なのでしょうか。 注射筒を利用する場合は、先端に詰めるもの（フリット？）は何を 利用すべきでしょうか。レジンは90マイクロメートル径のものを 利用する予定です。 以上、ご存じの方がおられましたらご教授いただければ幸甚です。 どうぞよろしくお願いいたします。

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