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(無題) 削除/引用 No.5933-6 - 2017/04/24 (月) 01:48:18 - おお >脱リン酸ベクターを使っている場合、PCRのデザインによっては原理的にかからないケースもあると思うのだがどうだろうか？ 私もそう思った。 でそもそもライゲースの活性さえあればライゲーションはできているはずなので、、、

(無題) 削除/引用 No.5933-5 - 2017/04/23 (日) 22:45:33 - 中年 ナンセンスな間違いをしてさえいなければ、ライゲーション産物の中に正しい産物が全く含まれていないってことはあり得ない。問題になるのは、バックグラウンドとして出てくる望んでない産物に対する狙った産物の割合だから、有無をチェックするようなPCRをしてもあまり意味がないでしょうね。

(無題) 削除/引用 No.5933-4 - 2017/04/23 (日) 21:38:47 - AP コンピは自作すればなんぼでもできるので節約なんて考えない。 トランスフォーメーションがうまくいかないときでも、目的のライゲーション産物が全くできていないことはまずないので、PCRかければいつもポジティヴになるだろうね。 脱リン酸ベクターを使っている場合、PCRのデザインによっては原理的にかからないケースもあると思うのだがどうだろうか？

(無題) 削除/引用 No.5933-3 - 2017/04/23 (日) 18:24:49 - おお PCRでポジであっても、コピー数が十分かとか、からのベクターなどがドミナントで取れないような状況の回避とかいろいろ考えないといけない事があるのでは？ それよりライゲーションしてから電気泳動で確かめるとか、確かめるだけじゃなくってライゲーションされたものだけ精製するとかしたほうが良さそうじゃないですか。

(無題) 削除/引用 No.5933-2 - 2017/04/23 (日) 18:08:24 - プッ 時間と金の無駄

トランスフォーメーションの前に 削除/引用 No.5933-1 - 2017/04/23 (日) 17:22:22 - ピスケ こんにちは。 ligation反応の後には コンピテントセルにトランスフォーメーションを行うのですが トランスフォーメーションを行う前に ligation産物をテンプレートとして目的のプラスミドができているかを PCRで確認を行うのはナンセンスでしょうか。 そちらの方がコンピテントセルの節約になると思うのですが どなたかやられている方はいらっしゃいますでしょうか。 お教えいただければ幸いです。 よろしくお願い致します。

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