いつもありがたく拝見しております。
少し前から、新たにヒト造血幹細胞の培養に挑戦しています。
具体的には、ヒトCD34+細胞を業者から購入してexpandし、その後の実験に用いようと思っています。エレクトロポレーションをするので結構な量まで増やしたいと思っています。
論文をあたると、無血清培地にSCF, TPO, FLT3Lを入れ、場合によってはIL-3, IL-6をいれて培養すると結構増えるように書かれているものが多いのですが、組成や組み合わせを変えてもなかなか増えず、また増えてもサイズがまちまちで視細胞も多くフローサイトでも均一な集団としてゲーティングしがたい状態になってしまいます。唯一、StemCell technologyのSFEMII＋Expansion supplementを使うとよく増え、細胞の見た目も均一かつ活きがよく保てるのですが、これはこれで本来増殖性の低い幹細胞がこんなに増えていいのかという気もしますし、なによりばか高いのでこの先も使い続けようという気にはなかなかなれません。
こうした問題は細胞のロットや、ドナー間の差でみられる現象なのでしょうか、それともSCF、TPO、FLT3Lを入れる以上の、知る人ぞ知るコツのようなものがあるのでしょうか。もしくは、これが普通でCD34+細胞のExpansionは「そういうもの」なのでしょうか？
なお、ここまでの培地の至適化は、Frozen stockで送られてきた細胞をSFEMII+expansion supplementで起こし、増えたところでFreeze stockを作成（StemCell tecのマニュアルに準拠）したものを使用しています。自作のストックをPassage 2として、見当はPassage 4までで行っております。
長文でのお尋ねとなってしまい申し訳ございません。
私の周りにはCD34+細胞を扱う研究者がおらず、人づてにあたれるだけあたったのですがアドバイスを頂ける方がついぞ見つけられませんでした。
どなたかお力をお貸しいただければ幸いです。
よろしくお願い申し上げます。
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