Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

抗体の保存 トピック削除
No.5910-TOPIC - 2017/04/14 (金) 21:42:31 - なぞ
はじめて質問させていただきます。
2次抗体を-80℃に保存しておき、久しぶりに解凍しました。
Freeze throwは分注した時と今回workingにしたときにのみなのですが、このようなことで抗体の特異性が著しく下がった経験はありますか?
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



11件 ( 1 〜 11 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.5910-11 - 2017/04/17 (月) 11:46:45 - タグっち
ないないw

(無題) 削除/引用
No.5910-10 - 2017/04/16 (日) 20:35:48 - うーん
ないね

(無題) 削除/引用
No.5910-9 - 2017/04/16 (日) 11:06:01 - おお
Fc receptorとか抗体に結合するような蛋白がしっかりと発現していたらもしかしたら2次抗体だけでシグナルが出る可能性はあると思います。組織だと血液など抗体がたくさんある部分を含んでいたらそれが異種であってもいくらかシグナルが出てしまうことがあるかもしれません。IPで異種の抗体を使っても最近の高感度のケミルミ試薬ではそれなりにシグナルが出てしまいます。

(無題) 削除/引用
No.5910-8 - 2017/04/16 (日) 08:57:40 - 小言幸兵衛
同じサンプル、同じ条件でウエスタンしたところ、freeze-thawを経ていない2次抗体では出ていなかった非特異的バンドが、freeze-thawしたものでは出るようになったということですか?それとも、他にもサンプルもしくは条件に違いがありますか?

(無題) 削除/引用
No.5910-7 - 2017/04/15 (土) 22:26:32 - ないない
ないですね

(無題) 削除/引用
No.5910-6 - 2017/04/15 (土) 19:56:48 - O
サンプルはなんですか?
2次抗体の認識するimmunoglobulinの動物種とサンプルの由来動物種が同じあるは比較的近縁だと(マウスとラットみたいな)血液を含むようなサンプルの場合(動物組織など)残存する血液由来のimmunoglobulinと反応して50K付近や20K付近に強いバンドがでることはよくあります。高感度系なので、十分に血液を除去したつもりでもけっこう出ます。IPなどでも同様のことが起こります。いわゆるnon-specificというのとは意味合いがちょっとちがうけど。

(無題) 削除/引用
No.5910-5 - 2017/04/15 (土) 19:37:15 - なぞ
2次抗体のみを反応させたところ、非特異的なバンドが出てきました。
>[Re:3] おおさんは書きました :
> 凍結融解でWork しなくなったという経験はないと思います。
> >抗体の特異性が著しく下がった
> 特異性の問題だったのかHRPの活性の問題であったのかなどどの様に見極めたのでしょうか?非特異バンドが出てきたのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.5910-4 - 2017/04/15 (土) 16:15:20 - O
凍結状態で届く事は多いので、結局2回凍結融解になることはよくあるとおもいますが、幸い、それで抗体が失活したという経験はいまのところありませんし、周囲でも聞きません。もちろんケースバイケースなので、抗体によっては起こることもありえるとはおもいます。HRPも比較的タフな酵素なので大丈夫なような気がします。凍結保存する前からもともと変だったということのほうが可能性としてあるとおもいます。

(無題) 削除/引用
No.5910-3 - 2017/04/15 (土) 01:45:25 - おお
凍結融解でWork しなくなったという経験はないと思います。
>抗体の特異性が著しく下がった
特異性の問題だったのかHRPの活性の問題であったのかなどどの様に見極めたのでしょうか?非特異バンドが出てきたのでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.5910-2 - 2017/04/14 (金) 22:38:59 - Nanashi_et_al
ありません

抗体の保存 削除/引用
No.5910-1 - 2017/04/14 (金) 21:42:31 - なぞ
はじめて質問させていただきます。
2次抗体を-80℃に保存しておき、久しぶりに解凍しました。
Freeze throwは分注した時と今回workingにしたときにのみなのですが、このようなことで抗体の特異性が著しく下がった経験はありますか?

11件 ( 1 〜 11 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。