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SDS電気泳動でのウェルのアプライの体積計算 トピック削除
No.583-TOPIC - 2012/05/28 (月) 22:14:33 - まるるん
サンプル名体積(μL)
#7 M    12.3
#7 1    18.3
#7 2    11.6
#7 3    2.7
#19 M    6.8
#19 1    12.4
#19 2    5.7
#19 3    7.3

このサンプルは50μgあたりの体積なんですが、
この各サンプルをSDSー電気泳動でウェルに対して10μL(2×染色Bufferもまた何μLいれればいいかわからない)流したいんですが、計算方法が分かりません。どなたか、分かる方いますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.583-7 - 2012/05/31 (木) 22:08:51 - (´ゝ`)
ウェルあたりのアプライ量を10μlにそろえたいその理由は何よ。蛋白質量をそろえるなら分かるけど。

(無題) 削除/引用
No.583-6 - 2012/05/31 (木) 17:07:07 - Incognito
TCA沈殿でもした後に体積を揃えればいいだけじゃないでしょうか。
2×染色Bufferというのは2倍濃度のブルージュースのことと思われますが。

(無題) 削除/引用
No.583-5 - 2012/05/30 (水) 08:12:14 - Q
私には、まるるんさんが何を聞きたいのかよくわからないのです。

あ、 削除/引用
No.583-4 - 2012/05/29 (火) 09:48:51 - ~
>ウェルに対して10μL
これは、アプライする全量のことですよね。
先に、2×染色Buffer側の話を片付けましょう。

(無題) 削除/引用
No.583-3 - 2012/05/29 (火) 09:45:56 - ~
書かれていませんが、各ウェルのタンパク質濃度を出来るだけ高い濃度で揃えて泳動したいのですよね。

@50 ug/20uL
A50 ug/10uL
のサンプルを考えて見ましょう。
・アプライ量を最大にするためには、一番薄い濃度のサンプルを最大量アプライすることになるというのは分かりますよね。
・どれが一番濃度が薄いかは分かりますよね。
・一番薄いサンプルを10uLとった場合のタンパク質量は計算できますね。
・そのタンパク質量と同じタンパク質量となる、残りのサンプルの体積も計算できますね。

>2×染色Bufferもまた何μLいれればいいかわからない
この名前のbufferを見たことがありませんが、まるるんさんが作った組成ではありませんよね?
どこかで発表されているbufferであれば、そこに組成と使用方法が書かれているはずです。
その文献(論文や参考書、メーカーのインストラクション等)を見て、そこに書かれている推奨量を入れましょう。
この考え方さえ覚えれば、次に使い方の分からない溶液を使うことになったときも対応できます。

(無題) 削除/引用
No.583-2 - 2012/05/28 (月) 22:23:52 - aaaa
近くに誰か教えてくれる人はいないのですか?
もう少し、自分で考えてください。
ここで聞いたとおりやって、失敗してもあなたの責任ですよ。
まぁ、どうやってやったか聞かれてネットで聞いてやりましたと言えるのならいいと思いますが。

SDS電気泳動でのウェルのアプライの体積計算 削除/引用
No.583-1 - 2012/05/28 (月) 22:14:33 - まるるん
サンプル名体積(μL)
#7 M    12.3
#7 1    18.3
#7 2    11.6
#7 3    2.7
#19 M    6.8
#19 1    12.4
#19 2    5.7
#19 3    7.3

このサンプルは50μgあたりの体積なんですが、
この各サンプルをSDSー電気泳動でウェルに対して10μL(2×染色Bufferもまた何μLいれればいいかわからない)流したいんですが、計算方法が分かりません。どなたか、分かる方いますか?

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