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L26を用いた免疫染色手技 トピック削除
No.581-TOPIC - 2012/05/28 (月) 18:32:31 - chami
ニチレイ製のL26抗体を用いた免疫染色がうまくいきません。
どなたかご存知の方がいらっしゃいましたらご教授ください。
宜しくお願いします。

前処置を変更したり希釈倍率を濃く変更しても、失敗続きです。
注意すべき処理工程があるのでしょうか。
行なってきた前処置は、
・圧力鍋で７分加熱
・圧力鍋で１０分
・電子レンジ６００W　４分×３回
・電子レンジ６００W　５分×３回
希釈倍率
・１００倍
・５０倍
です。宜しくお願いします。
　
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コメントをありがとうございます。 削除/引用
No.581-10 - 2012/06/04 (月) 19:36:43 - chami
載せそびれていました、申し訳ありません。
脱パラ操作は行なっているのです。
他に思いつく限りのことを、とにかくやってみようと思います。

(無題) 削除/引用
No.581-9 - 2012/06/03 (日) 15:45:35 - torisugari
試料はパラフィンだったりしませんか？これだと、賦活化の前に脱パラ操作が必要ですが。

(無題) 削除/引用
No.581-8 - 2012/06/01 (金) 16:55:52 - chami
はい、ヒトのサンプルです。
ゆくゆくは動物サンプルも実施したいのですが‥。

PDFダウンロードページまで行って下さった方をはじめ、
大変ありがたく、感謝しております。

(無題) 削除/引用
No.581-7 - 2012/05/31 (木) 19:29:12 - Flow-Joe
ヒトのサンプルでよろしいですか？

(無題) 削除/引用
No.581-6 - 2012/05/31 (木) 18:57:31 - qq
ここのメーカーのHPはPDFを落とすだけでも、名前を書けとおっしゃるのですね。（組織染色では有名どころなのに、うるさい感じ。）
ま、ユーザー対応が良いことの顕れかもしれんから、メーカーに直接聞くのがいいんじゃないでしょうか？
USAとEU向けのHPだと、自由にダウンロードできます。この違いはなに？

二次抗体は 削除/引用
No.581-5 - 2012/05/31 (木) 18:11:11 - chami
二次抗体は、酵素試薬工程も一緒に行える、
ニチレイ製の「ヒストファイン　シンプルステインMAX-PO(MULTI)」
を使用しています。
この薬品は、アミノ酸ポリマーにペルオキシダーゼとFab’にした抗マウスIg（動物種：ヤギ）
および抗ウサギIg（動物種：ヤギ）を結合させた標識ポリマーです。

抜けている情報が多く、申し訳ありません‥。

(無題) 削除/引用
No.581-4 - 2012/05/31 (木) 13:19:15 - ふぅ
・・・２次抗体は？

大変失礼いたしました。 削除/引用
No.581-3 - 2012/05/31 (木) 12:56:26 - chami
確かにJInさんの仰る通りです。
ご指摘を感謝いたします。
このおっちょこちょいが、上手くいかない大きな要因かもしれません‥。

染まらない状況→全く何も染まりません。ノンスペが出る気配もありません。

ポジコンは→現在ポジコンであるリンパ節のみを用いて染色しています。

固定条件→１０％ホルマリン

です。
質問方法から間違ってしまうような未熟者で、
大変お恥ずかしいのですが、どなたかお分かりになられる方が
いらっしゃいましたら、宜しくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.581-2 - 2012/05/29 (火) 09:05:26 - JIn
私はこの抗体は使ってませんが、この手の質問をするのであれば、

・染まらないというのはどのような状態を指すのか？
（全くなにも見えないのか、ノンスペが多いのかetc）

・ポジコンはとっているか？

・観察したい組織はどこで、固定方法は何を用いたのか？

などの詳細がわからないと誰も答えようがないのではないでしょうか？？

L26を用いた免疫染色手技 削除/引用
No.581-1 - 2012/05/28 (月) 18:32:31 - chami
ニチレイ製のL26抗体を用いた免疫染色がうまくいきません。
どなたかご存知の方がいらっしゃいましたらご教授ください。
宜しくお願いします。

前処置を変更したり希釈倍率を濃く変更しても、失敗続きです。
注意すべき処理工程があるのでしょうか。
行なってきた前処置は、
・圧力鍋で７分加熱
・圧力鍋で１０分
・電子レンジ６００W　４分×３回
・電子レンジ６００W　５分×３回
希釈倍率
・１００倍
・５０倍
です。宜しくお願いします。
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