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(無題) 削除/引用 No.5806-3 - 2017/03/07 (火) 02:26:39 - may monさん、 NEBのHiFi DNA assemblyを使っています。 > 基本的には、酵素Mix中のExonucleaseの活性(ほとんどは5'->3')を考えれば答えは出ますよ。 たしかに、原理をよく読んでなかったです。 確かにexonuclease活性を考えればわかることでした。 私の場合、flame shiftが起こると思いますので、単純には使えそうにないです。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.5806-2 - 2017/03/05 (日) 13:21:09 - mon seamless cloningとは商品名というより技術名なので、どのメーカーの製品でしょうか？ https://www.neb.com/applications/cloning-and-synthetic-biology/seamless-cloning 市販品だと、Thermo (GeneArt)、NEB(Gibson Assembly、NEBuilder)、TAKARA(InFusion)が有名ですね。 基本的には、酵素Mix中のExonucleaseの活性(ほとんどは5'->3')を考えれば答えは出ますよ。

seamlessクローニング 削除/引用 No.5806-1 - 2017/03/03 (金) 23:57:30 - may 最近、制限酵素を使わないseamless cloningというのを試して、効率が制限酵素の時と比べて若干悪いですが、一応インサートはあったので、別のクローニングに使おうとしていますが、一つ教えてほしいことがあります。 今回Ｎ末タグがすでに入っているベクターにインサートを入れようとしています。 ベクターの配列は次のような感じです。 ATC CTG-（ここまでがタグ）-CTC GAG ACC TCT GAG TAA-ベクター 基本的には制限酵素XhoIとXbaIを使って入れるようになっていますが、できればタグのすぐ直後から目的遺伝子の配列が来るようにしたいです。 インサートはそのようにデザインしてPCR産物を得ました。 問題はベクター側をXhoIとXbaIで切ってseamlessでつなげると、そのリンカー部分の配列がどうなるのかがちょっとわかりません。 一番確実なのはベクター側もPCRすることですが、かなり大きいのでできれば避けたいです。 このような目的でseamlessは使えないものでしょうか？ ぜひ教えてください。

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