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(無題) 削除/引用 No.5804-5 - 2017/03/03 (金) 19:56:48 - toto 完全な繰り返し配列だとダメですが、多少の違いのある繰り返しなら、IDTのgBlockで合成できるかもしれません。配列を入れてみれば、合成できるかどうかサイトで判定してくれます。

(無題) 削除/引用 No.5804-4 - 2017/03/03 (金) 17:52:30 - 774R >制限酵素の切り張りで増幅させています の意味がちょっと分かりかねるのですが、具体的になにをやったのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.5804-3 - 2017/03/03 (金) 17:48:17 - AA 繰り返し配列の中身にもよりますが、 takaraのprimestarGXLでPCRはうまく行ったことがあります。 ctが250回位続く領域を含む配列でした。

(無題) 削除/引用 No.5804-2 - 2017/03/03 (金) 17:31:14 - 3-3 いくつか質問させてください ・その「繰り返し配列」自体は何bp程度のものですか？ ・また、600bp程度を狙っているようですが何回の配列でその長さになるものですか？ ・そもそも狙っている繰り返し数のものを単一で得るのは難しいと思うのですが 　そのあたりの条件については何か既報があるのでしょうか？ ・差支えなければご利用の制限酵素について教えてください

繰り返し配列の増幅困難 削除/引用 No.5804-1 - 2017/03/03 (金) 16:59:17 - TOKIO いつも参考にさせていただいております。 現在疾患遺伝子の繰り返し配列部分を制限酵素の切り張りで増幅させています。 300bpぐらいまでは増えるのですが、それ以上になるとrecombinationが起きてしまうようで、300bp以上の断片が取れません。具体的には本来600bpが取れるはずが200-300bpぐらいのバラバラなサイズの断片ができているようです。 recombination deficientな大腸菌(NEB Stable)等を使っても全く改善しませんでした。非常にGC richな配列です。 PCRによる増幅もGC richなために不可能でした。 誰か困難を改善できる方法をご存知な方はいらっしゃらないでしょうか？

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