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(無題) 削除/引用 No.5783-11 - 2017/02/28 (火) 11:23:09 - MgCl ↓すみません勘違いがありました。 普通に溶けましたね

(無題) 削除/引用 No.5783-10 - 2017/02/28 (火) 10:40:25 - MgCl おおさま、 3.5M MgCl 純水に溶けました？ それとももっと低い濃度でおこなっていましたか？

(無題) 削除/引用 No.5783-9 - 2017/02/24 (金) 17:50:10 - MgCl 乙さん おっしゃるとおりですね。 とりあえずバッファー無しで見てみます。 プロトコールの通りにひとまずやってみようと思い、 その通りに調製出来なかったので質問したのですが、 やはり調製手順などが違うのですかね。 たとえばの話が皆さんがおっしゃるとおり 不向きならばなぜそれを表記しているのかも ちょっと疑問です。

(無題) 削除/引用 No.5783-8 - 2017/02/24 (金) 17:43:11 - MgCl おおさん MgCl2を水に溶かすと6付近ですか...それならば大丈夫だと思います。 今回調製した際は水に溶かす前にリン酸バッファーで溶かしてしまい、 それでpHが4-5付近(試験紙で簡易的にしか見てませんが)だったので、 MgCl2自体はもっと低いと思っていました... バッファー無しの方がよさそうですね。 それで一度調製してみます。

(無題) 削除/引用 No.5783-7 - 2017/02/24 (金) 17:40:07 - 乙 たとえばリン酸bufferとか、ということであって、別にリン酸bufferでないとだめということではないので、TrisとかHEPESとかBorateとかでもいいとおもう。

(無題) 削除/引用 No.5783-6 - 2017/02/24 (金) 17:30:47 - おお >(ほぼNa2HPO4に溶かしてpH4~5の溶液)に >NaOHをいくらか足して7にするのも問題は無いですか？ もしこのようにどうしてもしたいのなら、私ならTRISとかでpHを持ち上げます。

(無題) 削除/引用 No.5783-5 - 2017/02/24 (金) 17:27:30 - おお MgCl2を水に溶かすとpH６ぐらいになるそうだけどそれでも厳しいですか？個人的にリン酸はだめだと思うんだけど。てかやったことあるんで。

(無題) 削除/引用 No.5783-4 - 2017/02/24 (金) 16:03:12 - MgCl お二方、お早い回答ありがとうございます。 リン酸緩衝液自体がちょっと不向きな感じでしたか... 再調整、別のバッファーで試してみます。 もったいないっちゃもったいないので、 既に調製してしまったバッファー(ほぼNa2HPO4に溶かしてpH4~5の溶液)に NaOHをいくらか足して7にするのも問題は無いですか？ やっぱり析出しちゃいますかね それとも溶出直後に中和の方がマシですかね... なかなかpHに敏感なタンパクでして余り低pHにさらしたく無いんですよね...

(無題) 削除/引用 No.5783-3 - 2017/02/24 (金) 11:26:03 - AP Mgはリン酸と難容性の塩を作りますから、大量のMgイオンでリン酸基が不活化されてるんじゃないでしょうか。調製手順によっては回避できるのかもしれませんが(ストック溶液で加えるかソリッドで加えるか、どれを先にどれをあとに加えるか、とか)。 コメントにあるようにバッファは必ずしも必要ないし、リン酸こだわらずTrisバッファなんかでもいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.5783-2 - 2017/02/24 (金) 10:55:42 - おお マグネシウムはリン酸と相性悪いのと、アルカリ側で沈殿しやすい（OH-と反応）のでHEPESとかでpH７．０か少し酸性側でやるほうが無難かなと思います。またはバッファーを加えなくても問題はないでしょう。

Elution Buffer 削除/引用 No.5783-1 - 2017/02/24 (金) 10:16:51 - MgCl お世話になってます。 Gen scriptのProtein A 磁気ビーズのプロトコールに、 溶出条件で酸性にしたくない場合、Elution Bufferを下記の条件で試してみてはと プロトコール(のトラブルシューティング)に書いてあるのですが、 3.5M MgCl2を10 mM phosphate（Na2HPO4・NaH2PO4）ではpHを7.2にすることが出来ません。 Na2HPO4だけで試してもダメだったのでNaOHなどを加えるべきでしょうか? 私が基本的な事を間違っているかもしれないので間違っていたら教えて下さると助かります。 以下、プロトコールの文章です。 Try another elution reagent, such as 3.5 M MgCl2, 10 mM phosphate, pH7.2. Desalt or dialyze the eluted sample into a suitable buffer.

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