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PGEX-6P1 vector のBamHi サイトの利用 削除/引用 No.5769-3 - 2017/02/20 (月) 13:06:09 - PGEX ご返信ありがとうございます。 成功されていた人がいるというだけで、勇気づけられました。カラムも試してみます。

(無題) 削除/引用 No.5769-2 - 2017/02/20 (月) 11:38:52 - PYK 私はpGEX-6P1ベクターにBamHI-SalIで何種類か遺伝子を入れて発現させていますが、全てプレシジョンで切断されました。 ただ私は、GST-fusionタンパクをグルタチオンで精製はせず、そのままOn culumnで切断させていました。 原因はわかりかねますが、もしかしたら目的タンパク質のフォールディングが影響しているのかもしれませんね。GSTの他にもHisやMBPなどを試されてもいいかもしれません。

PGEX-6P1 vector のBamHi サイトの利用 削除/引用 No.5769-1 - 2017/02/18 (土) 14:06:15 - PGEX PGEX-6P1 vector のBamHi-XhoI サイトの利用後、BL21 (DE) によって、GSTと目的タンパクを可溶画分に発現させることに成功しました。しかし、GST カラムで精製後、prescission 酵素を加え、16時間4度でおいても、なかなか酵素切断が起きません。この理由を探っています。 １、BamHi サイトはGST 切断において、GST に近すぎて切断できていないということはありますか？ ２、Elusion buffer (Reduced glutathione) の残存があったとして、酵素切断に与える影響はありますか？

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