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無血清培地について トピック削除
No.5728-TOPIC - 2017/02/02 (木) 13:16:31 - かけだし大学院生
shRNA導入用のレンチウイルス作成の実験をしています。。。

vector plasmidとpackaging vector、transfection reagentを無血清培地DMEMで混合するという工程があるのですが、、、

無血清培地とはいわゆるDMEMに、FBSを混ぜる前のものという理解でいいんでしょうか。。。（買ったばかりのDMEM）

それとも無血清DMEMという商品があるのでしょうか。。。

なぜ無血清でなければならないのかも、若干疑問です。（ウイルス産生中の293T細胞の培地は血清FBS入りのDMEMで培養しておりますし、、、）
　
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有難う御座います。 解決済み 削除/引用
No.5728-3 - 2017/02/03 (金) 10:31:36 - かけだし大学院生
大変参考になりました。丁重に有難う御座います。

(無題) 削除/引用
No.5728-2 - 2017/02/02 (木) 14:50:39 - mon
transfection試薬とDNAを混合する「無血清培地」は買ったばかりのDMEMで良いです。pH安定用にHEPESを10-25mM添加してもよいです。
なお細胞を培養するための「無血清培地」は増殖因子や微量元素（Fe,Sr等)、場合により脂質・ビタミンの添加が必要です。
血清成分はtransfection試薬とDNAとが複合体を作るのを阻害しますので、汎用される試薬は通常無血清培地で複合体を形成させます。最近の試薬ならDNA複合体になれば血清含有培地でも安定なです（昔はダメだった）。
複合体を滴下するときに無血清培地（＋細胞）を使うと導入効率が上がります。ただし3-10時間程度で血清含有培地に交換する必要がありますし、毒性が出やすいで注意が必要です。

無血清培地について 削除/引用
No.5728-1 - 2017/02/02 (木) 13:16:31 - かけだし大学院生
shRNA導入用のレンチウイルス作成の実験をしています。。。

vector plasmidとpackaging vector、transfection reagentを無血清培地DMEMで混合するという工程があるのですが、、、

無血清培地とはいわゆるDMEMに、FBSを混ぜる前のものという理解でいいんでしょうか。。。（買ったばかりのDMEM）

それとも無血清DMEMという商品があるのでしょうか。。。

なぜ無血清でなければならないのかも、若干疑問です。（ウイルス産生中の293T細胞の培地は血清FBS入りのDMEMで培養しておりますし、、、）
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