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(無題) 削除/引用 No.5693-5 - 2017/01/21 (土) 03:43:53 - あお ２０１７さま、わかりにくい説明ですみませんでした。 死細胞とdoubletsは除去しているのですが、pan-CD４5抗体の非特異性なのでしょうか。別のクローンでも染色を試してみたいと思います。 アドバイス頂きありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.5693-4 - 2017/01/21 (土) 00:51:47 - 2017 パンCD45でゲートをまずしているんですね。それを一番始めにいってもらわないと。 ひとつはそのパン抗体の非特異性。 死細胞除去、ダブレットエクスクルージョンはされていますか？ 組織からだとそういったものを除去しないと非特異的吸着が問題になりそうですが。

(無題) 削除/引用 No.5693-3 - 2017/01/20 (金) 23:35:33 - あお ２０１７さん、コメントありがとうございます。 私が調べているのはマウスの血管です。確かに血球以外も含まれているので、CD４５でまずゲートした中をCD４５．１とCD４５．２で染めているのですが、なぜかdouble negativeが見られるので、不思議に思っております。

(無題) 削除/引用 No.5693-2 - 2017/01/20 (金) 02:14:05 - 2017 リベラーゼ処理はしたことありませんが、そういう類いの実験はコラゲナーゼ4でやっていますね。 まあそれはいいとして、組織はどこでしょう？ストローマや非血球系細胞を観ているだけではありませんか？ リンパ節ではほとんどがCD45＋ですが、私はCD45-の非血球系の仕事をしています。 具体的にはblood endothelial cells, lymphatic endothelial cells,fibroblastic reticular cellsなどです。組織によってはそういう細胞群が多く占める場合もありますよ。実質細胞なんか特に。

CD45.1 CD45.2 double negative cell について 削除/引用 No.5693-1 - 2017/01/20 (金) 02:06:23 - あお いつも参考にさせていただいています。 ワイルドタイプのB６マウスにCD４５．１陽性細胞を移入して、CD４５．１陽性細胞の割合を組織で調べる実験を行っております。 組織をdigestionして、ある細胞分画の中でCD４５．１とCD４５．２陽性細胞の割合を見ているのですが、３０−４０％近くdouble negative細胞が見られました。 理論的にはすべてのCD45陽性細胞がCD４５．１かCD４５．２陽性になるはずだと思ったので、CD４５陽性細胞の中でさらにCD４５．１とCD４５．２を染めても、やはりdouble negative細胞が見られました。ちなみに、リンパ節ではdouble negative細胞は見られませんでした。もしこのような実験にお詳しい方がおられましたら、どういう原因が考えられるか（リベラーゼで組織をdigestionしていますが、その影響も考えられる？）ご教示いただけませんでしょうか。わかりにくい説明で恐縮ですが、宜しくお願い致します。

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