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ラミニンの簡易染色方法 トピック削除
No.5690-TOPIC - 2017/01/19 (木) 11:40:38 - もんちゃん
抗体を使わずにラミニンを染色したいのです。
一般的にタンパク質を染色できるブリリアントを用いて
コートされたラミニン膜の染色を試みましたが染色できませんでした。
なにか簡易的な方法を教えてください、お願いします。
　
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染色乙さん　有難うございます 削除/引用
No.5690-9 - 2017/01/26 (木) 12:27:58 - もんちゃん
有難うございます。
但し、今の私には少し難易度が高い気がします。
でも調査してみます

おお　さん　　返答ありがとうございます 削除/引用
No.5690-8 - 2017/01/26 (木) 12:26:11 - もんちゃん
銀染色ですね。
調査してみます。何回も回答頂き感謝しています。

(無題) 削除/引用
No.5690-7 - 2017/01/22 (日) 02:51:58 - 染色乙
インテグリンのリコンビナント（全長だと溶けないかもしれないので、RGDを認識する部位を含めれば全長でなくてもいいかもしれない）を作って（市販のがあれば買って）それを蛍光とかなにかで標識したものを使えば。他に接着因子がなければいけるんじゃないかな。特異性はRGDペプチドで競合阻害できるかどうかで判断するとかして。

(無題) 削除/引用
No.5690-6 - 2017/01/20 (金) 18:57:51 - おお
その染色したいものの上にラミニンしか蛋白がないなら銀染色でもいけるかもよ。
定量性には難があるけど。

と一応無責任なアイデアをおいておきます。

(無題) 削除/引用
No.5690-5 - 2017/01/20 (金) 18:16:56 - もんちゃん
APさん
回答有難うございます。
大変参考になります。
ラミニンのパターニングを考えており
簡易的、安価な染色が必要です。
色々と考えてみます。

おお　さん　　返答ありがとうございます 削除/引用
No.5690-4 - 2017/01/20 (金) 18:14:12 - もんちゃん
おお　さん
迅速な返答ありがとうございます。
予算の関係でできるだけ身近にあるものを利
用したいと考えています。
ご指摘のRuby Protein Gel Stainは高価であり
また確実性も？ですので、それであれば高価な免疫染色
で確実性を確保した方がよいと考えています。

(無題) 削除/引用
No.5690-3 - 2017/01/19 (木) 14:46:26 - AP
コートされたラミニン膜ってどういうのかよくわからないんですけれど・
ラミニン単体を何かにコーティングして、その首尾を染めてみてみようってことですか？

高度に酸性糖鎖で修飾されているはずなので、塩基性色素ならある程度染まるでしょう。アニリンブルーなんかが思い浮かびます。複数の色素の混合物であるギムザなんかもいけるかも。メジャーなヘマトキシリンあたりでも。

あとニンヒドリン反応なんてのは？

(無題) 削除/引用
No.5690-2 - 2017/01/19 (木) 13:33:46 - おお
ブリリアントというのはSDSPAGEで染色するCBBですよね。ということは特異的でなくてもいいんでしょうか。それなら蛍光色素をカルボキシル基やアミノ基にクロスリンクしてしまうような方法は取れないでしょうか。

またはCBBのようなゲル染色用の試薬で蛍光色素をつかうものがあります。以下のホームページの蛍光試薬は銀染色かそれ以上の感度だと書いてます。

https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/S12000

ラミニンの簡易染色方法 削除/引用
No.5690-1 - 2017/01/19 (木) 11:40:38 - もんちゃん
抗体を使わずにラミニンを染色したいのです。
一般的にタンパク質を染色できるブリリアントを用いて
コートされたラミニン膜の染色を試みましたが染色できませんでした。
なにか簡易的な方法を教えてください、お願いします。
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