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核内にα-vimentinは存在しますか? トピック削除
No.5664-TOPIC - 2017/01/10 (火) 12:37:50 - 初心者
WBで使用するサンプルを作製するため、
動物組織から細胞質タンパク質と核タンパク質を抽出したのですが、

うまく抽出できたかを確認するために、
チューブリンとビメンチンの抗体を用いて、
両分画をWBにて検出しました。
(当研究室に核タンパクマーカーとなるような抗体がなかったため)

チューブリンは核分画では検出されず、細胞質分画のみでバンドが見られました。
しかし、ビメンチンに関しては、核分画で濃いバンド、細胞質分画で薄いバンドが検出されました。


核にアクチンが存在する事を知り、もしかしたら細胞骨格であるビメンチンも
核内に存在する可能性があるのかと思い質問させて頂きました。

どなたか、どうかご教授お願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.5664-7 - 2017/01/11 (水) 04:06:20 - おお
>核内に存在する可能性があるのか
否定的なアイデアばかりだしていますが、この可能性を100%捨てる必要はないかもしれません。その辺も調査したり実験的に肯定できる系があるのかなども(やるかどうかという話はありますが)考えてみるといいかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.5664-6 - 2017/01/10 (火) 18:06:06 - 初心者
ご丁寧にありがとうございました。
論文、読んでみます。

(無題) 削除/引用
No.5664-5 - 2017/01/10 (火) 17:59:34 - おお
http://www.molbiolcell.org/content/24/15/2454.full.pdf+html
少し調査もするといいかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.5664-4 - 2017/01/10 (火) 17:37:36 - おお
核膜から細胞質に突き出ているのだから、細胞質にあるものが核により核分画に引きこまれるのではないかと。
それか重合したフィラメントが非常に巨大で核を回収するような遠心力でも沈殿する可能性も否定できないですね。

ありがとうございます 削除/引用
No.5664-3 - 2017/01/10 (火) 16:13:40 - 初心者
さっそくのお返事ありがとうございます。

初歩的な質問ですみませんが、

核分画のほうがバンドが濃く出たのは、
ビメンチンは細胞質よりも核膜に結合して存在している量が多いという
ような理解でよろしいのでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.5664-2 - 2017/01/10 (火) 13:59:57 - おお
核内にあるというより核の表面に末端とかが結合していたりする模式図を見たことがありますので、それで核のフラクションにいってしまうというイメージがありますけど。

核内にα-vimentinは存在しますか? 削除/引用
No.5664-1 - 2017/01/10 (火) 12:37:50 - 初心者
WBで使用するサンプルを作製するため、
動物組織から細胞質タンパク質と核タンパク質を抽出したのですが、

うまく抽出できたかを確認するために、
チューブリンとビメンチンの抗体を用いて、
両分画をWBにて検出しました。
(当研究室に核タンパクマーカーとなるような抗体がなかったため)

チューブリンは核分画では検出されず、細胞質分画のみでバンドが見られました。
しかし、ビメンチンに関しては、核分画で濃いバンド、細胞質分画で薄いバンドが検出されました。


核にアクチンが存在する事を知り、もしかしたら細胞骨格であるビメンチンも
核内に存在する可能性があるのかと思い質問させて頂きました。

どなたか、どうかご教授お願いします。

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