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(無題) 削除/引用 No.5655-3 - 2017/01/22 (日) 13:34:17 - alpha 経験談で、根拠がないので、ご参考までに。 厚い組織は薄切すると、OCTの組織の間で切れてしまうことが多々あります。 私も皮膚をOCT包埋で薄切したことがありますが、結局、15umぐらいまで厚めに切った記憶があります。 可能であれば、パラフィンで包埋することをお勧めします。

(無題) 削除/引用 No.5655-2 - 2017/01/20 (金) 00:16:42 - mikio 凍結切片作成までの手法はほぼ同様（スクロースは40％にしてますが、そこはあまり問題でないでしょう）にして、腸管や脳神経系組織の凍結切片を調整しています。 皮膚組織を使用されているようですが、表皮より真皮、特に脂肪の含有が多くなるほどクライオスタットで薄切し、プレパに貼り付けるときに構造が潰れたりなど標本作成が難しいと予想されますが、何μmくらいで薄切されてますか？10μm以上など厚くカットすると貼り付けるときに、いくらか組織の把持性が良いかもしれません。 凍結切片では硬さの差が異なる部分を含む組織では、薄切時にブレードの抵抗が急に変わるので、そこでスライスに段差ができたり、丸まってしまったりしやすく（私は腸管壁と腸管膜でしたが）、切片作成の難易度が上がるような気がしています。 あとは-80度からクライオスタットにブロックを運ぶ時に、ドライアイスに入れて運ばれていますか？移動時の間でも常温にすると解凍が急速に進むので組織損傷の原因になる可能性があります。また、-80度保存（霜取り機能なし）でも、長期間（1ヶ月以上とか）経過しているものでは、なぜか空泡化などの損傷や染色ムラがみられたことがありました。

組織の凍結包埋について 削除/引用 No.5655-1 - 2017/01/06 (金) 17:03:32 - ちゃうちゃう 凍結包埋法について、詳しい方アドバイスお願いいたします。 現在実験に使っている組織の凍結包埋が上手くいかず困っています。 何度切っても、組織の損傷が激しく、 ところどころ脱水したように組織が収縮したような状態になります。 組織がこのような状態になる原因があれば、教えていただきたいです。 組織の包埋手順は ・4%PFA固定　24h ・30%スクロース置換（組織が沈むまで） ・O.C.T compoundで包埋 ・液体窒素で凍結 ・-80℃保存 です。 組織は、固い表皮性組織と柔らかい真皮性組織が組み合わさったものを使っています。（特に損傷がひどいのは真皮の方です） 宜しくお願いします。

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