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(無題) 削除/引用 No.5618-3 - 2016/12/16 (金) 18:20:34 - TE > PKさん ご教授ありがとうございます。 >培養細胞から無血清培地への分泌タンパクを、アミコンで濃縮後IPしてmass specに >かけた事が何回かありますが、再現性をもって落ちてきたタンパクについては、濃 >縮前のサンプルに戻ってIPウエスタンしても確認可能な場合が結構あります。 PKさんの上記の経験談が聞けてとても良かったです。 血漿をAmiconで限外ろ過したことがあります。アルブミンは濃縮されていたので可能だろうと考えております。 とにかく、一度実験を行ってみることにします。

(無題) 削除/引用 No.5618-2 - 2016/12/16 (金) 08:43:06 - PK 前提として、血漿のような含有タンパク量が多い（かつ凝固因子を含む）サンプルをアミコンで濃縮できるのか、確認した方が良いかもしれません。 培養細胞から無血清培地への分泌タンパクを、アミコンで濃縮後IPしてmass specにかけた事が何回かありますが、再現性をもって落ちてきたタンパクについては、濃縮前のサンプルに戻ってIPウエスタンしても確認可能な場合が結構あります。よって、しっかりした相互作用であれば、限外濾過で濃縮しても大丈夫なんだろうと思っています。ただし、濃縮の過程でこわれてしまったコンプレックスがどのくらいあるかについての回答にはなりませんね。弱い結合であれば壊れてしまう場合があってもおかしくないと思います。

限外ろ過による相互作用分子への影響について 削除/引用 No.5618-1 - 2016/12/16 (金) 08:12:52 - TE 詳しい先輩方、ご教授ください。 血漿中でタンパク質Aと相互作用しているタンパク質を網羅的に同定しようと考えております。 方法は、タンパク質Aの抗体を用いて免疫沈降を行い、LC/MS/MSで同定しようと考えております。 血漿中のタンパク質Aの濃度が低値であるため、アミコンウルトラ-0.5 mL 遠心式フィルターで限外ろ過して濃縮した後に免疫沈降を行おうと考えています。 質問です。 相互作用しているタンパク質が限外ろ過により、物理的な力で離れてしまうことも考えられるのでしょうか。 ご教授のほど、どうかよろしくお願い申し上げます。

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