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(無題) 削除/引用 No.559-6 - 2012/05/26 (土) 16:49:28 - TS 血清用で高感度のものがありませんか。 ラットの場合は<1pg/mLくらいまでいけるやつがありますよ。 まぁDuosetよりも高価だとは思います。

(無題) 削除/引用 No.559-5 - 2012/05/26 (土) 16:14:10 - Kちゃん みなさま 貴重なアドバイスありがとうございます。 TSさん 期待されるTNFα濃度は、レンジ下限ギリギリです。おそらく、10pg/mlの血中濃度が期待されますが、自分の実験では検出限界下限が約4pg/mlです。 またあ、使用されているキットは、確かに細胞培養液用ですが、取扱説明書には、Diluentを工夫することによって血清も測定できると書かれていました。 ~さん ご指摘のキットです。 現在、そのご指摘の通りにFCSの代わりにFBSを用いて、さまざまな条件で再測定を試みていますが、やはり今のところ上手くいきません。 予想されるTNFα濃度がかなり低い（検出限界下限あたり）と想定されるため、サンプルの希釈をせずに原液で測定を試みています。 TOMOMOさん ご指摘の通り、測定するタイミングが重要のようで、測定できていた論文も、発症2週目で測定されていました。そこで、発症から2週間目のマウスを用いて測定を試みていますが、今のところやはり測定できていない状況です。 また、何か他にアドバイスがありましたら、ぜひ教えてください。

(無題) 削除/引用 No.559-4 - 2012/05/26 (土) 09:35:54 - TOMOMO 学会のポスター発表で見た、という程度の情報ですが、参考までに。 関節炎マウス(確か、コラーゲン誘導性関節炎）で、経時的に炎症性サイトカインを測定しているポスターがありました。 その結果では、血中のTNFαは発症後早期(1，2週頃？）にピークがあり、その後は低下し、検出感度以下になってました。 これは個人的経験ですが、コラーゲン誘導性関節炎マウスの初回免疫から8週時点での血液では、関節炎が残っているマウスにおいてもTNFは検出できませんでした。 使ったキットはR&DのDuoセット。おそらく同じ物です。 なので、血中のTNF濃度は採血のタイミングによるのかもしれないですね。

(無題) 削除/引用 No.559-3 - 2012/05/25 (金) 14:21:43 - ~ http://www.rndsystems.com/pdf/dy410.pdf このキットでしょうか？ インストラクションの1ページ目に、 DuoSets are designed for the analysis of cell culture supernates. や Other sample types, such as serum and plasma, need to be validated prior to use in this DuoSet.(1) と書かれていますし、(1)の脚注には (1)1If assaying sample types other than cell culture supernates, each laboratory should develop and validate its own diluent. We suggest starting with PBS supplemented with 10-50% fetal calf serum. The diluent must not be と書かれていますので、希釈倍率については、自身で検討するのが要求されていますよね。 >サンプルは希釈せずに行いました。 という実験が、希釈系列の予備検討を元に行なわれたのでなければ、 測れなくても不思議は無いと思いますが。

(無題) 削除/引用 No.559-2 - 2012/05/25 (金) 12:52:28 - TS 確認ですが、マウスの血清中に期待されるTNFα濃度は、キットの検出レンジに入っておりますか? 私は、ラットでの実験が多いですが、血清濃度に対応したキットばかりではないので。血清サンプルはだめで、細胞培養液とかを対象にしているキットとかがありますよ。

関節炎マウス中の血清TNFα 削除/引用 No.559-1 - 2012/05/24 (木) 22:07:51 - Kちゃん 教えてください。 今、関節炎を起こしたマウスの血清TNFαの測定を試みているのですが、市販のELISAキットでは測定できませんでした。 我々はR＆D社のDuosetという測定キットを用いています。また、サンプルは希釈せずに行いました。 いくつかの論文で測定に成功しているグループがあるのですが（問い合わせましたが、あまり良い返事がありませんでした。。。）、同じく、測定に成功している方がおりましたら、何かコツみたいなものがあれば教えてください。

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