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No.5583-TOPIC - 2016/11/28 (月) 22:17:18 - 好中球のウェスタンのこと。
今日、好中球ライゼートのウェスタンをしたら、抗マウスIgG抗体(2次抗体)と反応する蛋白質が結構あるんですが(1次抗体なしでやったものでも明瞭なバンドが7本くらいある)、そういうものでしょうか。組織とか他の細胞ではそういうことないので2次抗体がアレという訳ではないです。好中球はちゃんと洗ってるし、好中球はヒト由来でもマウス由来でも同じように出るので血漿成分が混入という事でもないと思います。
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No.5583-4 - 2016/11/30 (水) 17:56:32 - 123456789
Blockin剤をBSAからskim milkに変えたところ、2次抗体による非特異的なシグナル(分子量的にはFcγRらしい)が全て消えました。1次抗体の認識する分子のシグナルはちゃんと残ってました。Skim milkにはmilk IgGというのがそれなりの量含まれているらしいので、たぶんそれがFcブロックの働きをしたみたいです。
ありがとうございました。
(無題)
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No.5583-3 - 2016/11/29 (火) 21:45:51 - 123456789
ありがとうございます。
やっぱそうですか。FcRですか。Fcブロックしてみます。
(無題)
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No.5583-2 - 2016/11/29 (火) 13:23:37 - mon
Fcレセプターが変性していてもIgGに結合するか、多少Renatureしたものが混ざっているかではないでしょうか。。
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No.5583-1 - 2016/11/28 (月) 22:17:18 - 好中球のウェスタンのこと。
今日、好中球ライゼートのウェスタンをしたら、抗マウスIgG抗体(2次抗体)と反応する蛋白質が結構あるんですが(1次抗体なしでやったものでも明瞭なバンドが7本くらいある)、そういうものでしょうか。組織とか他の細胞ではそういうことないので2次抗体がアレという訳ではないです。好中球はちゃんと洗ってるし、好中球はヒト由来でもマウス由来でも同じように出るので血漿成分が混入という事でもないと思います。
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