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(無題) 削除/引用 No.5558-21 - 2016/11/26 (土) 05:16:03 - おお >サイトカイン溶液をブルーアイスで送ってくる。それで心配になり聞いてみたことがあるのだが、ロットごとに安定性（37℃で1週間保持、凍融解5回だか10回しても生物活性が落ちない）を見ているとのこと。凍結乾燥品のELISA STDはさらに安定のはず。 ELISA STDだと生物学的活性は必要ないわけだし、LPSのコンタミも大きな懸念にならないし、無菌かどうかにこだわる必要もないわけで粗精製品でいいような気もするが、、、

(無題) 削除/引用 No.5558-20 - 2016/11/25 (金) 13:51:04 - おお まあプロテアーゼの混入とか確かに勝手な想像ですけど、使えないんだから仕方がない。ロット管理がなされていてなぜゆえこういう事になっているのか不思議ではありますけど。ロット管理の結果と違うことが起こっているようだともいえますよね。管理の方法論がしっかりしていてもそれをすり抜けて変なのが混じったとか取り違えが起こっているとか、、、管理の方法論がしっかりしているところが強調されると逆になんだかその方法論をしっかり実施できてないんじゃないかとか、そんなところを疑ってしまったりする。。

(無題) 削除/引用 No.5558-19 - 2016/11/25 (金) 13:40:32 - おお おそらく昔のスタンダードで実験ができるので今のところ支障がないということかと思いますが、報告だけでもしていただけたほうが他のユーザーが同じロットをつかって同じトラブルになるとか言うのを防げたりする可能性もありますし、今後購入するときの原因が究明されて改善されているということもありうるので、そうするほうが何かといいかと思います。

(無題) 削除/引用 No.5558-18 - 2016/11/25 (金) 12:09:20 - PK kmさんのコメントを見ると、保存してある昔のスタンダードを使えば、当面の実験は大丈夫のようで、何よりです。 BioLegendを愛用している一消費者としては、できればサポート担当の方に連絡だけでも入れておいて頂きたいようにも思いますが、、、　リコンビナントに限定的で、かつ、最近出てきた問題のようなので、BioLegend内で直近の変更点などを検証してもらえれば、解決しそうな気がします。サポートの方々の良心的な対応から見て、きっちり内部で対応してもらえるのではないかと。

(無題) 削除/引用 No.5558-17 - 2016/11/25 (金) 10:58:25 - P > それなりに時間が取られてしまうので、今は控えようと思います。 データの根幹にかかわるのでそれでいいのかとも思うが…。それとも他社キットに乗り換えるのか？それなら、新しいキットでBioLegend STDの新旧ロットも含めてtroubleshootingもいれるのがよい。 ちなみに、おおさんのプロテアーゼの混入の可能性は基本ないと思ってよいらしい。BioLegendリコンビナントタンパクの商品は、日本では販売代理店がドライアイスで持ってくるのかもしれないが、アメリカではサイトカイン溶液をブルーアイスで送ってくる。それで心配になり聞いてみたことがあるのだが、ロットごとに安定性（37℃で1週間保持、凍融解5回だか10回しても生物活性が落ちない）を見ているとのこと。凍結乾燥品のELISA STDはさらに安定のはず。

(無題) 削除/引用 No.5558-15 - 2016/11/25 (金) 09:22:04 - km 色々とコメント、有り難うございます。 マウスIL-2のELISAに関して、新たな検討を行いました。 研究室ではIL-2を頻繁に測定するので、様々なLotのIL-2のstandardサンプルがあります。5年ほど前のLot（B127698)と、最新のLot（B207712)を比較しました。standardサンプル以外は、全て同じLotのものを使用しました。やはり、旧Lotは問題なく、新Lotはやはり、メーカー保証の濃度範囲内の4分の1ぐらいまでしか測定できませんでした。 とりあえず、BioLegendのサポーターの方と相談したいところですが、かなり親切ですので、それなりに時間が取られてしまうので、今は控えようと思います。 ただ、なんとなく気になるのは、IL-10以外にIL-2もそうであったように、他のBioLegendのELISAに関しても、同じようにstandardサンプルが今一なELISAがあるような気がします。なので、ここの場で、情報を共有できれば、幸いです。

Certificate of Analysis 削除/引用 No.5558-14 - 2016/11/25 (金) 08:25:49 - P BioLegendのwebからロット番号を入れるとそのロットのCertificate of Analysisが出るみたい。BioLegendは同じリコンビナントタンパクもELISA STD用とバイオアッセイ用の2種類出しているみたいだから、COAもそれぞれの用途に合わせた検定をしているんじゃないかな？もちろん安定化剤の有無とかの違いもあるのだろうけど。開いてみて何が書いてあるか教えてくれないかな。

(無題) 削除/引用 No.5558-13 - 2016/11/25 (金) 08:12:39 - P BioLegendのELISA kitについて詳しいわけではないが、基本どの会社でもELISAスタンダードは凍結乾燥品として入ってて、使用時に自分で付属の溶解液で再構成するはず。その時、いくらのvolumeで再構成するかはロットによって異なっていて、その数値はまさにメーカーによるロットごとのバリデーションで決まっている。スタンダードがおかしいとは、その凍結乾燥の仕方にムラがあるとか凍結乾燥品が不安定であるということになるが、いくらなんでも・・・、ね。 ちなみに、今の時代ロットごとのバリデーションは生物系の試薬はどこもしていると思う。しばしばよくない意味で出てくるSantaC...も比較的新しい商品は実際のサンプルで使えることをTDSに示しているし、ロットごとにも確認している（はず）よ。

(無題) 削除/引用 No.5558-12 - 2016/11/25 (金) 05:30:31 - おお リコンビナントのようですね。問い合わせに色々やってもらってたみたいですので、そういった対応も悪くはないようですが、リコンビナント（スタンダード）の物自体が、、、って感じのようです。 ELISAも実験によってどこまでちゃんとしたスタンダードが必要かピンきりでしょうけど、絶対定量では困りますよね、、、手元に何かそういう標品があればキットのものを使わなくてもいいでしょうけど、、、

(無題) 削除/引用 No.5558-11 - 2016/11/25 (金) 04:46:32 - PK BioLegendではFACS用の抗体しか買った事がないですが、外れた事がありません。良心的な価格設定とあわせ、自分にとってはFACS用の抗体購入先のファーストチョイスの一つです。 ただし、リコンビナントはBioLegendで買った事がないので、何とも言えません。ここで問題になっているのは、ELISAキット内の抗体ではなく、リコンビナントですよね？

(無題) 削除/引用 No.5558-10 - 2016/11/24 (木) 23:46:22 - P > Biolegend, 値段は安いですけどね。確かBD(だったかな？)かなんかの人が立ち上げたベンチャーで、品質は良いみたいな触れ込みを聞いたことがありました。 BioLegend CEOはPharMingenを立ち上げた3人衆のうちの一人。PharMingenを大きくしたのちBDに売却。その後、一人がeBioを立ち上げ、もう一人がBioLegendを立ち上げた。eBioの創立者はだいぶ前に引退、その後eBioはAffimetrixに買収された。BioLegendの方は創立者がずっと頑張って独立を保っている。

キットなんだから 削除/引用 No.5558-9 - 2016/11/24 (木) 23:39:19 - P 単品で売っている抗体ならまだしも（まあ抗体も100% satisfaction guranteedと言っているが）、キットはどの会社でもしっかりバリデーションしているはず。また、クレーム入れたなら、同一ロットでテストしてくれるはずだが… なにかキット外のところに問題があるような気がする。バッファーを作る水とか、wash bufferとか。 キットはcapture抗体がpre-coatのタイプと、自分でcoatするタイプがあるけどどっち？

(無題) 削除/引用 No.5558-8 - 2016/11/23 (水) 20:01:05 - ％ 質的な点と、安価な少容量品を用意してくれているなど良心的な価格設定の点で他社よりもいい。トラブル時の対応も誠実。

(無題) 削除/引用 No.5558-7 - 2016/11/20 (日) 15:18:08 - まっくろん Biolegend, 値段は安いですけどね。確かBD(だったかな？)かなんかの人が立ち上げたベンチャーで、品質は良いみたいな触れ込みを聞いたことがありました。ただ、このような話があるのであれば、再考も検討しなくてはとおもいました。貴重な情報、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.5558-6 - 2016/11/19 (土) 15:54:10 - TS Biolegendって評判良くないんでしょうか。 出入りの業者が、ELISAやFACS抗体を安くできるからって進めてくるんです。 ラインナップも多いし、海外ではすごく使われていると。 これまでe-bioscienceとか使ってて、そのような情報をもとに、 乗り換えを少し検討していたところなのです。

(無題) 削除/引用 No.5558-5 - 2016/11/19 (土) 12:03:32 - km "おお”さん、”まっくろん”さん、返答ありがとうございます。 　IL-10に関しては、実は、BioLegendとかなりのやりとりをしました（20回ぐらいのメールのやりとりと、最後にはBioLegendのサポーターの方が謝りに来られました）。手持ちのキットを用いて、BioLegendのサポートの方が言われるとおりにやり直したり、USAから新しいキットを送ってもらって、やり直したりもしました。しかし、すべて駄目でした。結局、違うサイトカインのキットに交換してもらうことで、一件落着させました。 IL-2に関しては、まだ、問合せしていません。IL-2のstandardは、凍結乾燥しているものを今回はすぐに使用しましたが、protocolの規定の範囲の3分の1ぐらいしか検出できていません。ちなみに、自分のサンプルは濃すぎて5-パラメーターで検量線を引くと、吸光値が高すぎて測定不能となってしまうぐらい、ELISAはワークしていると思っています。

(無題) 削除/引用 No.5558-4 - 2016/11/19 (土) 11:17:09 - おお スタンダードの安定性が悪いのかな（プロテアーゼなどの混入とかで）という感じがしていて、会社側のスタンダードの精製度とか品質管理などの問題かもしれないと思いましたが、それを考慮に入れた上で会社がどんなコメントや対応をしたのか聞きたかった次第です。

(無題) 削除/引用 No.5558-3 - 2016/11/19 (土) 08:58:27 - まっくろん うちでも同様のことが起こりましたが、うちの場合の原因はストックを薄く作りすぎていたことでした。それからは濃く作って、半分グリセロールを混ぜて、-20度で保存してますが、特に問題は起こっていません。kmさんに当てはまるかわかりませんが、取り敢えず情報として。

(無題) 削除/引用 No.5558-2 - 2016/11/19 (土) 02:36:04 - おお BioLegend には問い合わせましたか？

BioLegend ELISA standardサンプルに疑問？ 削除/引用 No.5558-1 - 2016/11/18 (金) 11:44:49 - km 測定するサイトカインににもよると思いますが、最近、IL-10やIL-2のstandardサンプルの濃度がメーカー保証の濃度範囲内の半分か3分の1ぐらいまでしか、測定できないのですが（特にIL-10は全く機能しません）、同じようなトラブルに遭遇された方はいませんか？

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