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ΔΔCt法での増幅効率の範囲 トピック削除
No.5550-TOPIC - 2016/11/13 (日) 18:10:30 - 初心
いつもお世話になっております。
リアルタイムPCR法の解析法の1つであるΔΔCt法はターゲット遺伝子とハウスキーピング遺伝子の増幅効率が限りなく100%に近くないと用いられない。と、リアルタイムPCRの参考書に記載されていたのですが、具体的に何%以上であれば大丈夫という目安のようなものはあるのでしょうか?
もしくはそのような記載があるHPなどがあればお教えいただきたいです。

よろしくお願いします。
 
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(無題) 削除/引用
No.5550-6 - 2017/02/03 (金) 15:58:58 - IHC?
刧僂t(Livak)法って、元論文に前提条件として最初に5回検量線引け、って書いてあるんで
その効率で補正しちゃうパッフルやればいいんじゃないかと思いますが

(無題) 削除/引用
No.5550-5 - 2016/11/25 (金) 14:03:59 - おお
>TargetとRefferenceの増幅効率が一致している
まあそれはそうですが、とくに現在いろいろな95%以上の効率のプライマーが設計されていてインターナルコントロールなどそれを使う事が多い中、80%にあわせて他のプライマーを設計するかというとそちらのほうが面倒ではありますので、、、

検量線引けば確かに解決しますね。

(無題) 削除/引用
No.5550-4 - 2016/11/25 (金) 13:47:27 - %
昔は80-120%という話もありました。(タカラのカタログ)

元となるLivak論文自体は%規定を設けていません。

むしろLivakがFig1で示しているように
TargetとRefferenceの増幅効率が一致していることの方が大事です。

5倍多く見積もるものを、5倍小さく見積もるもので補正してしまっては
何が何だか分からなくなりますよね?
(Livakは五回検量線を引いてそれを確認しています)

ふつーに考えて、検量線を同じプレート上に引いた方が楽ですよ

MIQEが出た今、刧僂tにこだわる論文の結果を私は相手にしません

(無題) 削除/引用
No.5550-3 - 2016/11/15 (火) 15:22:37 - 初心
ありがとうございます!

(無題) 削除/引用
No.5550-2 - 2016/11/14 (月) 03:27:17 - おお
ttp://www.gene-quantification.com/real-time-pcr-guide-bio-rad.pdf

Page 4

とくにddCtで95ー105と書いているのも見たけど、、、今探しきれないです。

ΔΔCt法での増幅効率の範囲 削除/引用
No.5550-1 - 2016/11/13 (日) 18:10:30 - 初心
いつもお世話になっております。
リアルタイムPCR法の解析法の1つであるΔΔCt法はターゲット遺伝子とハウスキーピング遺伝子の増幅効率が限りなく100%に近くないと用いられない。と、リアルタイムPCRの参考書に記載されていたのですが、具体的に何%以上であれば大丈夫という目安のようなものはあるのでしょうか?
もしくはそのような記載があるHPなどがあればお教えいただきたいです。

よろしくお願いします。

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