全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.5538-6 - 2016/11/10 (木) 16:35:54 - かたつむり おお様、ご返答ありがとうございます。 5年ものでも使用することができるということで私の研究室にあるものは 古くても1年以内なので少し安心しました。 しかし、コンタミの可能性は考えられる点なので注意していきたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.5538-5 - 2016/11/10 (木) 01:04:02 - おお うちの現状としてはバッファーはバッファー用のBoxがあってそこにどんどん溜まっていっているのですが、そこから古い方から取り出して使ってます（ってかランダム取り出して使って戻している人もいる）。組成はトリスと塩化ナトリウム（または塩化カリウム）、塩化マグネシウム、DTTなどの還元剤です（新しく開発されたようなメーカー独自のものでないならカタログなどに組成が乗ってます, また酵素によってはそれ用のバッファーがあってそのたコファクターが入れてあるものもありますけど）。またBSAを別に添加しなくていいようにBSAを含んだものもあるようです（NEBの新しいやつとか）。 なのでカッコないで書いたようなものでなければ、そんなに変になる要素はないですし同じバッファーでも酵素と同時についてくるもの以外では相性が悪いとかないです。強いて言えば還元剤が弱ってくるかもしれませんが今まで５年ものとか使ってても働いていることは働いています。 酵素がおかしいという件、誰かがバッファーか酵素に違う酵素とかをコンタミさせたとかないかな、、、

(無題) 削除/引用 No.5538-4 - 2016/11/09 (水) 18:47:09 - かたつむり AP様、774様、ご返答ありがとうございます。 ロットが同じであれば酵素の具合も同じだと思っていたので驚きました。 試薬は問題ではないようですね。 メーカーに問い合わせてみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.5538-3 - 2016/11/09 (水) 18:13:10 - 774 同一のバッファーなので、組成変更がない限り全く問題ないでしょう。 むしろダメだ場合の方が問題かと思います。 経験上、組成が似たようなバッファーであれば違うメーカーのものでも問題ないです。 文面を読む限り、新しい酵素がダメなのではないかと思います。 （ロットの問題ではなく、そのチューブの酵素が） 他のプラスミドをちゃんと切断できるか確認してみるのがいいんじゃないかと思います。

(無題) 削除/引用 No.5538-2 - 2016/11/09 (水) 18:09:37 - AP 基本的には他メーカーの添付バッファーを使っても問題ありません。 あるわけがない。添付バッファーのほとんどはUniversal Buffer systemだもの。 FastCutやらHFやら、メーカーオリジナルの特殊な改変系は除きます。 >現在、プラスミド（約5kbp）を切断するためにNotIを使用しているのですが、 ロットが同じの新しい酵素を使うとバンドがスメアになってしまうためその後の実験が滞っている状態です。 これは製品自体の問題である可能性もあるので、メーカーに問い合わせるべき問題でしょう。同ロットで別の納品先でも同じ問題が起こっているとか、たまにあります。問題が認められれば無償交換、そうでなくても、じゃかわりにこのロットを使ってみて、というふうに無償提供になると思います。

制限酵素添付のバッファーが余ったとき 削除/引用 No.5538-1 - 2016/11/09 (水) 18:00:01 - かたつむり いつもこちらで勉強させていただいている者です。 制限酵素を購入するとその酵素に最適なバッファーや試薬が添付されていると思いますが、 いつも制限酵素を使いきった時に余ってしまいます。 同じメーカー、同じ制限酵素を追加で購入したとして、 この余った試薬を使用してもよいのでしょうか。 現在、プラスミド（約5kbp）を切断するためにNotIを使用しているのですが、 ロットが同じの新しい酵素を使うとバンドがスメアになってしまうためその後の実験が滞っている状態です。 それまで使用していた酵素で同じ反応条件でプラスミドが切断されていることは確認しているので酵素のロットや反応条件が悪いとは考えにくいです。 また、プラスミドが変異しているのではと(可能性としては低いですが)違うロットのプラスミドを使用しても同様の結果でした。 あと考えられたのがこれまでの試薬と新しく購入した酵素との相性が悪いのか、という点でした。 そこで皆さまに伺いたいのですが、 余ったものを使用していいのか 上記のようなことが起こったことがあるのか です。 基本的な質問で大変お恥ずかしいですがどうかご教授ください。

全6件 ( 1 〜 6 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---