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(無題) 削除/引用 No.5531-5 - 2016/11/08 (火) 13:57:13 - 774 一度試してダメなら買い直す。

(無題) 削除/引用 No.5531-4 - 2016/11/08 (火) 13:37:11 - 774R 想像で書きますが、 最初の溶解でプライマー濃度は100uMですかね？ さらに10倍希釈したものを調製し、反応系に20分の1加えるとすると、 都合、200倍希釈ですか。 １MのTrisは最終的に5mMにまで薄まりますね。 よほどシビアなPCRじゃなければ結果に差は出ないかと。

(無題) 削除/引用 No.5531-3 - 2016/11/08 (火) 13:16:49 - おお それでプライマーの濃度がどれくらいで、どれほど希釈して使うつもりですか？ エタ沈は手かもしれませんけど、かなり小さいのでロスする可能性も考えたほうがいいと思いますがどうでしょうかね。モレクロなど見て確認してほしいんですがMgイオンを入れると小さいDNAはエタ沈の効率を上げれるとかいったったかと。あとキャリアーがどの程度実験に影響するかなども考えた方がいいかもしれませんね。

影響があると見込まれます 削除/引用 No.5531-2 - 2016/11/08 (火) 13:09:11 - たろう 反応に持ち込むプライマー液由来のイオンが多くなって反応に影響がある(反応効率が悪くなる)だろうと思います。 なお、プライマーが劣化するといった意味で「プライマーに影響」することはないと思われます。 キャリアを入れた上でエタノール沈殿をしてから、当初溶解に用いようとしていた液量の1/4の10 mM Trisを入れて溶かして吸光度測定の後に目的の濃度に合わせることをおすすめします。 吸光度測定のブランクには溶解に用いる溶液を使って下さい。

プライマーの希釈液を間違えてしまいました。 削除/引用 No.5531-1 - 2016/11/08 (火) 12:55:16 - anri いつもお世話になっています。 25merのプライマーを２つSIGMAで頼んだものが届きました。 プライマー説明書にはプライマー原液を10 mM Tris-HCl ph7.4に溶解するよう書いてあったのですが、 私の試薬取り間違えで、1Mのもので希釈してしまいました。 プライマーに影響は出てしまうのでしょうか？ よろしくお願いします。

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