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(無題) 削除/引用 No.5527-2 - 2016/11/06 (日) 15:41:21 - おお PCRの性質上（変異入る以外のものもくわえて）少なければ少ないほうがいいです。ただ増えたのが確認できるくらいでないと次のステップに行きにくいでしょう。特にcDNAライブラリー（トータルやポリA RNAからcDNAをつくったとか）からだと発現の強さかかりにくさなどいろいろな要因がありますので、サイクルが多くなることがあるていどやむを得ないばあいもあるでしょう。 上限としてはたしかに３５回を目安にすればいいかと思います。それより十分少ないサイクルで増えるなら少ないサイクルでやったほうがいいです。 またサイクル数を単に増やすよりNestedなど工夫をして、特異性を担保するのも手かと思います。

クローニング時のサイクル数 削除/引用 No.5527-1 - 2016/11/06 (日) 15:27:13 - PCR ざっくりとした疑問ですけど、遺伝子をcDNAからクローニングする時、high fidelityの酵素を使ったとしてだいたいどのくらいのサイクル数でやりますか？ 私はHerculos II DNA polymeraseで35サイクル回してます。 35がギリかなあとは思ってますが、人によっては25, 30なのかなとも思うんですがどうなんでしょ。

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