Bio Technical フォーラム

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SDSPAGEのサンプル調整 トピック削除
No.5506-TOPIC - 2016/10/28 (金) 17:02:19 - simayako
大学で異種タンパク質の発現を行っている学部生です。
発現を行ったタンパク質をSDS-PAGEで確認しようと思っていたところ、
サンプルと2×PAGEバッファーと混ぜ、100℃で加熱して泳動をとウェルにサンプルを入れようとしたところ、沈殿せず、浮いてしまい、ウェルに入れることが出来ません。
自分は初めてこのような現象になったのですが、何回か研究室のメンバーが同じような現象を受けているようです。
 
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No.5506-5 - 2016/10/29 (土) 05:26:49 - western乙
忘グリセリンとおもう。5分もあれば作れるのだし、作り直すのがいい。

(無題) 削除/引用
No.5506-4 - 2016/10/28 (金) 23:27:56 - おお
長いDNAや有機溶媒が入っていたらそういうことが起こりがちです。

(無題) 削除/引用
No.5506-3 - 2016/10/28 (金) 18:00:44 - たていす
あまりにDNAが濃すぎると、サンプル中に微小なアワが混ざっていて、全体として軽くなっていることがあります。そんなときは、ネチョネチョのサンプルが浮いて、泳動バッファーの表面に拡がってしまったりして、あーーーやだ!!ということになる場合も有ります。

対応作としては、
1)サンプルをソニケーションして、DNAをズタズタにする。
2)サンプルを薄くする。(組み換えタンパクの発現だろうから、少しで十分では?)
3)1%TRITON X100(市販のLysis buffer)で可溶化した上清だけをサンプルとして、SDS-PAGEする。おそらくDNAをはあまり抽出されない。

こんなとこではないかな?

(無題) 削除/引用
No.5506-2 - 2016/10/28 (金) 17:44:10 - kkk
グリセロールの入れ忘れや
希釈倍率の間違いなどは無いでしょうか

SDSPAGEのサンプル調整 削除/引用
No.5506-1 - 2016/10/28 (金) 17:02:19 - simayako
大学で異種タンパク質の発現を行っている学部生です。
発現を行ったタンパク質をSDS-PAGEで確認しようと思っていたところ、
サンプルと2×PAGEバッファーと混ぜ、100℃で加熱して泳動をとウェルにサンプルを入れようとしたところ、沈殿せず、浮いてしまい、ウェルに入れることが出来ません。
自分は初めてこのような現象になったのですが、何回か研究室のメンバーが同じような現象を受けているようです。

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