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参考までに 削除/引用 No.5487-5 - 2016/10/20 (木) 11:58:49 - KIO 自分の経験上、LPSは1ug/mlが最高濃度です。 これでも高すぎでは？とreviewerに指摘されたことがあります。 マクロファージであれば100 ng/mlで反応します。 なお、Caco-2 cellsはFlagellinに対する反応性と比較しLPSやLTAに対する反応性はとても低いです。下記論文のsupplementary dataが参考になります。 http://www.nature.com/icb/journal/v92/n7/full/icb201431a.html 蛇足ですが、Caco-2 cellsの扱いは他の細胞株と比べやっかいですし、培養条件についてreviewerから詳細を求められることがあります。 上記論文でも培養条件設定について細かい説明がわざわざ記載されています。

(無題) 削除/引用 No.5487-4 - 2016/10/20 (木) 09:05:34 - kkko おお様 返信ありがとうございます。 細胞はCaco-2です。 この先のことも考えて、ある程度網羅的な条件検討をしておく必要があると判断しましたので、濃度検討をしようと思います。 Caco-2細胞でLPS刺激をしていらっしゃる方、アドバイスをしていただけると 助かります。 よろしくお願いいたします。

(無題) 削除/引用 No.5487-3 - 2016/10/19 (水) 15:49:30 - おお あと多分伏せる事情があるのかもしれませんので無理とは言いませんけど、細胞名とかがわかればその細胞で実際にLPS刺激実験している人からアドバイスがもらえるかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.5487-2 - 2016/10/19 (水) 15:44:39 - おお 予備実験として濃度を振ればいいでしょうけど、何を見るかはあなたの実験で何を求めているか次第だと思いますので、もう一度実験目的や最終的なゴール、作業仮説など見直しながら考えてください。 実験が将来その系を使っていろいろなことをしないといけない状況なら、ある程度網羅的な条件検討をしておくとこの実験ではこの濃度がベストだとか言えると思いますので先でやりやすいでしょう。

LPS刺激について 削除/引用 No.5487-1 - 2016/10/19 (水) 15:34:50 - kkko いつも勉強させていただいております。 今回初めてLPS刺激実験をすることになり、 皆様にアドバイスいただきたく書き込ませていただきました。 とある細胞にAという物質を添加後、LPS刺激を与え、 培養液中のサイトカインの測定をしたいと考えています。 使用するLPSはEscherichia coli 055:B5由来(suitable for cell culture) を予定しています。 LPSの添加濃度について文献をいくつかあたってみたところ 1μg/ml、20μg/ml、50μg/mlと、ばらばらでした。 あらかじめLPS濃度について検討したほうがいいのでしょうか？ もし予備検討するのであれば LPSの濃度をふってみて、細胞が放出するサイトカイン量を測定する という予備実験でいいのでしょうか。 経験のある方、ご存知の方、いらっしゃいましたら どうぞ宜しくお願いいたします。

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