Bio Technical フォーラム

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マウスのT細胞特異的に遺伝子を発現させる方法 トピック削除
No.5422-TOPIC - 2016/09/21 (水) 15:51:37 - IF
いつも勉強させていただいています.

科研費申請の時期になりました.
マウスのT細胞にだけ,ある遺伝子を発現させて腎炎が悪化するかどうか,検討したいと考えています.理論上可能でしょうか?また方法についてご存知の方がおられたらご教示ください.

このような実験動物,遺伝子導入マウスの作成で,外部委託で信頼できる会社をご存知でしょうか?申請書の経費見積もりの参考にしたいと思います.

よろしくおねがいします.
 
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(無題) 削除/引用
No.5422-4 - 2016/09/23 (金) 12:21:30 - IF
なるほど.
みなさまのご意見を参考に,資料をあたってみます.

ありがとうございました.

(無題) 削除/引用
No.5422-3 - 2016/09/21 (水) 23:43:12 - asan

T細胞と言っても末梢には色々な種類のT細胞がいますから、期待されるT細胞の機能にもよるでしょうが。一定のエフェクターT細胞なんかはex vivoでCD3刺激である程度維持して増幅させるプロトコールがあるので、それでレトロウイルス等でインフェクションをした上でWTかRAGKOマウス等に移植するのがいいんじゃないかと思いますが。もちろんWTのコントロールをmockとして移植したものとの比較になりますけどね。

単純なOEのシステムで過剰発現をする場合はROSAに入れといてdox等でinducibleなんかの系にするしかないですね。それかcreでstopカセットを飛ばすとかでしょうか?T細胞系で飛ばすのに良くやられるのはlck-creとかCD4creですね。あとはMX1-creとかで血球全体で飛ばすか、ですが。

外注はよくわかりませんが、一般的にtgを作ってる会社なら金出せばやってくれるでしょうね。ある程度知識があるなら理研あたりの外注なんかを使えれば安そうですが。

いずれにせよ良くわからないならば、想定してる実験系と同じような論文を探して、系はまねするのがいいんじゃないでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.5422-2 - 2016/09/21 (水) 21:49:32 - a
Cre-loxpシステムを利用したものをよく見かけます。
T細胞だとCD3が共通マーカーだと思いますが、CD3-Creマウスはあんまり見かけないような気がします。CD4-やCD8-Creマウスは知ってますが。
信頼性までは分かりません。すみません。

マウスのT細胞特異的に遺伝子を発現させる方法 削除/引用
No.5422-1 - 2016/09/21 (水) 15:51:37 - IF
いつも勉強させていただいています.

科研費申請の時期になりました.
マウスのT細胞にだけ,ある遺伝子を発現させて腎炎が悪化するかどうか,検討したいと考えています.理論上可能でしょうか?また方法についてご存知の方がおられたらご教示ください.

このような実験動物,遺伝子導入マウスの作成で,外部委託で信頼できる会社をご存知でしょうか?申請書の経費見積もりの参考にしたいと思います.

よろしくおねがいします.

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