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(無題) 削除/引用 No.5361-2 - 2016/08/27 (土) 15:44:57 - asan 1. CRISPR/Cas9用プラスミドは、細胞中で安定発現状態になることはないのでしょうか。 当然あります。ウイルスでインテグレートさせる場合もあれば、一過性で入れても一部はゲノム肉見込まれるのでステーブルに出続けます 2. 片側アレルにのみ変異が入った状態で1. の現象が起こった場合、培養を続けるうちに相同組み換えで元に戻ってしまうことはないのでしょうか。 当然あります。最近のNatureだったかによるとHDRは組み換え後がターゲットされないようにすると高効率に起きるとか言ってますし、この辺はknock inやってる人なら大体ターゲット後のPAMがつぶれるようにするとかします。ちなみにディーブシーケンスの出回ってる論文データだとだいたい1週間ぐらいすると巡り巡ってだいたい98%ぐらい何かしらの変異が生じてきれなく（にくく）なってるなんていうのもなんどか見た事があります。 ちなみにCAS9発現マウスはつくられてますが特にガイドを発現させなければ見た目ではピンピンしてますし、主要な組織でとくにCasp3陽性細胞が沢山いるなんてこともないようです。

CRISPR/Cas9について 削除/引用 No.5361-1 - 2016/08/26 (金) 20:44:28 - のの CRISPR/Cas9について、初心者質問させていただきます。 現在までに、あるタンパク質の過剰発現細胞は作成した経験があり、 それと比較したときにCRISPR/Cas9で疑問に思うことがあります。 1. CRISPR/Cas9用プラスミドは、細胞中で安定発現状態になることはないのでしょうか。 つまり、常に効き続け、目的領域の切断とDNA修復を起こし続ける...ということは起こりうるのでしょうか。 2. 片側アレルにのみ変異が入った状態で1. の現象が起こった場合、培養を続けるうちに相同組み換えで元に戻ってしまうことはないのでしょうか。 的外れな質問でしたら、申し訳ございません。回答いただけますと、幸いです。

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