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(無題) 削除/引用 No.5359-8 - 2016/08/27 (土) 02:00:33 - おお >[Re:7] ECLさんは書きました : > おお様、ありがとうございます。 > > とすると、同じチップで採取したことが原因と考えられますでしょうか？ > それかボトルの蓋をしばらくあけっぱなしにして、その結果H2O2の活性が落ちてしまったかなどでしょうか？ 両方共可能性としてはあるかもしれません。でも本当のこと言うとよくわかりません。室温で結構な時間放置してしまったとか、もしかしたら業者の取扱がたまたままずかったのかもしれません。昔アマシャムのキットを買って全然出なかったので電話したらロットを確認してくれと言われて、それを伝えたら、そのロットは古すぎますので代替え送りますと言われたことがあります。 一応どんな場合悪くなるかメーカーに問い合わせながら、そういうことはないというなら代替えを送る方向に持っていってもいいかもしれません。蓋をちゃんと締めるとか、室温で放置しないとか、同じチップを使わないとかはまあ基本事項ですので確認事項として一度話すといいんじゃないかなと思います。

(無題) 削除/引用 No.5359-7 - 2016/08/26 (金) 17:19:10 - ECL おお様、ありがとうございます。 とすると、同じチップで採取したことが原因と考えられますでしょうか？ それかボトルの蓋をしばらくあけっぱなしにして、その結果H2O2の活性が落ちてしまったかなどでしょうか？ 実は私が学部生の時、非常に優秀なポスドクの方にECLのボトルを同じチップで採ったためにすごく怒られた経験があるんです。10年前の話です。 何か手がかりがあればいいのですが・・

(無題) 削除/引用 No.5359-6 - 2016/08/26 (金) 17:15:45 - ECL 小児科医師（ゆとり教育）様、ありがとうございます。 消費期限を確認しようとしたところ、箱、ボトル共に記載はありませんでした。 3日前にwesternを行った際には、30 min, 5 minとexposureさせると、綺麗なtime dependencyが認められていましたし、それ以前も何百枚ものwesternを行ってきていますので、突然この二日余りでこのような事態になり（実際3枚ものwesternをこの2日で行いましたが、いずれも5 min以内にピークを迎えているようです。）、突然劣化するだろうか？と疑問です。 もし新入りの子達が何かをしてしまっているのでしたら、そこを改善したいと思っています。 その子達が、次、どうECLを使っているのか見ようとは思いますが。。結構まだ容量残っているんですよね。きちんと使えないことを示せたら、買い替えをお願いしようと思っています。ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.5359-5 - 2016/08/26 (金) 17:09:06 - ECL たていす様、ありがとうございます。 ECLと書いた方がわかりやすいかと思いそうしていましたが、実際の商品名を出した方がよかったですね。 1) SuperSignal™ West Pico Chemiluminescent Substrateというものです。 2) やはりそうですよね・・きちんと指導者がそこまで見ているかが疑問です。 > ３）焼き切れる可能性を考えるのであれば、短い露出から開始するべきでしょう。 今回の問題は、数日前まで出来ていたことができなくなったことです。短い露出から始めなくても全く問題ありませんでした。 > ４）露出時間の２倍の差はチャレンジする意味がないと思います。 検出しようとするタンパク質に依ると私は思います。2倍の差でも綺麗な段階的なbandsが得られます。別のタンパク質では3倍などすることも場合によってはあります。 >[Re:2] たていすさんは書きました : > １）ECLはGEの商品名だろう。thermoも幾つか出しているので製品名を出すほうが良い。 > ２）別々のチップで取るのが安心だと思います。 > ３）焼き切れる可能性を考えるのであれば、短い露出から開始するべきでしょう。 > ４）露出時間の２倍の差はチャレンジする意味がないと思います。わたしであれば、20sec＞1min＞3min＞必要であれば10minでやってみます。 > >

(無題) 削除/引用 No.5359-4 - 2016/08/26 (金) 14:12:31 - おお H2O2かそれの代わりになる酸化剤がヘタっているとそうなることがあります。

(無題) 削除/引用 No.5359-3 - 2016/08/26 (金) 09:54:25 - 小児科医師（ゆとり教育） 有効期限はいつまでですか？有効期限の過ぎた古いECLではそのような現象が起こることがあります。買い替えをお勧めします。

(無題) 削除/引用 No.5359-2 - 2016/08/26 (金) 09:33:03 - たていす １）ECLはGEの商品名だろう。thermoも幾つか出しているので製品名を出すほうが良い。 ２）別々のチップで取るのが安心だと思います。 ３）焼き切れる可能性を考えるのであれば、短い露出から開始するべきでしょう。 ４）露出時間の２倍の差はチャレンジする意味がないと思います。わたしであれば、20sec＞1min＞3min＞必要であれば10minでやってみます。

ECL exposureが速やかにピークを迎えてしまう件について 削除/引用 No.5359-1 - 2016/08/26 (金) 08:55:45 - ECL サーモから購入したECLキットを使ってこれまで沢山ウエスタンをしてきた者です。 ここ数日、X線フィルムへの検出を通常通り行ったところ、5分も続かず焼き付け？のピークが過ぎてしまいます。 例えば、GAPDHでさえ、5分、2.5分、1分、30秒と4段階のエクスポーズをすると、5分ではバンドが見えますが、それ以降の時間（2.5分でさえ）ではバンドが一切見えません。 アプライ量が多いため、GAPDHの量が多くECLの基質を速やかに消費してしまうから、とも考えられますが、これまで通り何も変えていないこと、GAPDH以外の他の抗体でも同様の結果になることから、何かが変だと思っています。 ここ数日になって2人の新人（共に中国の方です）がウエスタンをやりだしました。 彼らの上司がきちんとどこまで教えているのかわかりませんが、ECLに何かしていないか少し気になっています。例えば、ECLの白いボトルから採取した際に使用したチップを使ってもう一方の茶色のボトルから採取するということもやってしまっているかもしれません。 実際そのようなチップの使い回しでECLの検出がうまくいかなくなるなどの可能性はありますでしょうか？ それ以外の可能性につきましても、ありましたらご教示いただけますと幸いに存じます。 どうか宜しくお願い致します。

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