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(無題) 削除/引用 No.5344-3 - 2016/08/22 (月) 12:02:58 - シジュルカ AA様 ご回答ありがとうございます。 現在はRNAプローブを用いた蛍光二重標識にトライしており、最終的には、抗体反応も加えた蛍光三重標識を行いたいと考えています。 そのためにも、まずRNAプローブの二重標識がしたいのですが、、、 FastRedとの組み合わせで何か良い発色法または試薬をご存じでしたら、ご教授お願いします。

(無題) 削除/引用 No.5344-2 - 2016/08/22 (月) 08:57:59 - AA Fastredは免疫染色と重ねられますよ。 ISH終了からそのまま免疫染色のプロトコルに繋げればOKです。

FISHの二重標識について 削除/引用 No.5344-1 - 2016/08/19 (金) 17:03:59 - シジュルカ いつも参考にさせていただいております。 現在、RNAプローブを用いる蛍光二重標識の系を立ち上げようとしているのですが、なかなかうまくいっておりません。 これまでの流れは以下の通りです。 ↓発現部位既知のRNAプローブを作製 ↓DIG RNAプローブのBCIP/NBT標識で発現部位と手技を確認済み ↓同プローブを使ってFastRed標識（明瞭な染色像を確認） ↓蛍光二重標識をするために、DNP RNAプローブを合成（シーケンス&泳動確認） ↓ELFキット使ってスポットテストで発色確認 ↓組織切片を用いる蛍光染色ではシグナルが汚い（標識はキット通り）。具体的にはノンスぺが強く、特異的シグナルもこれまでの標識に比べると大分弱い。 最終的にはFastRed/ELFの二重標識を目指していたのですが、現在の染色効率では厳しいと考えております。 そこでご質問ですが、染色性を改善させる手技、またはFastRedと相性の良い他の標識法をご教授いただけると幸いです。蛍光波長はFastRedと重複しなければ特に気にしません。 どうぞよろしくお願いします。

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