Bio Technical フォーラム

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(無題) 削除/引用
No.5341-7 - 2016/08/18 (木) 23:25:21 - おお
測定がうまく行ってない可能性がありますので、ナノドロップの検体を置く部分を一度きれいにアルコールなどで拭いて、測り直してみてください。

もしそれが原因でないとすると、キットで抽出する時に何か溶液がうまく洗浄できていなかったのがDNAに入り込んでいるかもしれませんので、エタ沈して水かTEに再溶解するといいでしょう。

(無題) 削除/引用
No.5341-6 - 2016/08/18 (木) 22:50:46 - AP
細胞あたりの核酸量はRNAのほうがDNAより重量ベースで一桁は多いです。

ありがとうございます。 削除/引用
No.5341-5 - 2016/08/18 (木) 20:58:17 - ぱそ
ふみさま。

回答ありがとうございます。

いつもより大きすぎるくらいの山だったです。
波長はA260あたりで短波長よりではなかったような。。
でも、山の大きさにびっくりしてきちんと見ていなかったかもしれません。
明日、また確認してみたいと思います。


話は変わりますが、
培養細胞からDNA,RNAを抽出しているのですが、
いつもDNAの収量が悪く、RNAの十分の一くらいしかとれません。
RNAの方が壊れやすいからDNAの方がいっぱい取れるんじゃないのかな・・と
素人的には思ってしまうのですが、原因が分かりません。
研究室の誰がやってもDNAの収量はRNAより悪いです。
何か根本的な理由があると思うのですが。。。

ありがとうございます 削除/引用
No.5341-4 - 2016/08/18 (木) 20:45:31 - ぱそ
APさま。

お答えありがとうございます。

promegaの自動精製システムで抽出しています。
詳しい抽出法はわかりません。

DNAの濃度は240ng/µlくらいだったと思います。

この仕事を初めて2か月なので、分からないことだらけです。

スペクトルを取ってみては? 削除/引用
No.5341-3 - 2016/08/18 (木) 19:47:02 - ふみ
Nano dropならば、吸光度のスペクトルを取ることができるのではないでしょうか。
通常のDNA試料と違って短波長よりに大きな山があったりしないか確認するとよいと思います。

ちなみに、DNAを1時間on iceにしたからといってA260/A280の値がとても高くなったということは経験がありません。

(無題) 削除/引用
No.5341-2 - 2016/08/18 (木) 19:12:28 - AP
それだけだとなんも分からんなあ。

DNA抽出法はどういったものか?
測定された吸光度(濃度)はいくつか(どれくらいのレンジで測定されたのか)?

DNAの純度 削除/引用
No.5341-1 - 2016/08/18 (木) 19:06:31 - ぱそ
アドバイスお願いいたします。

培養細胞からDNAの抽出をして、Nano dropで濃度を測定しました。
その際A260/A280の値が6.4と異様に高い数値が出てしまいました。

いつもと違うことといったら抽出後、
濃度を測定するまで抽出液を1時間ほどon iceしていたことでしょうか。
普段は抽出が終わったらそれほど時間を置かず、濃度を測定しています。

これが原因なのでしょうか。

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