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エタノール固定とTriton X-100による透過処理について
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No.5276-TOPIC - 2016/07/26 (火) 17:42:27 -
nisu
細胞のDNAの含有量を調べています。細胞の中にPIを導入するための膜処理をするときプロトコルによると、エタノール固定とTriton X-100による透過処理の二つを行うように書いています。エタノール固定だけでも細胞膜に穴が開きPIが中に入り込む訳ではないのでしょうか?Triton X-100も必要な理由をご教授いただけないでしょうか?
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No.5276-3 - 2016/07/26 (火) 22:24:15 - おお
表面上の理屈では、Triton処理は必要ありませんけど、免疫染色の方法を流用したとか、、経験上そのほうが結果が安定しているとかあるかもしれません。余裕があったらTriton+ーで比較されたらどうでしょうか。
アルコールの固定は蛋白を凝集させるのでアクセスしにくくなるものもあるかもしれません。
(無題)
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No.5276-2 - 2016/07/26 (火) 21:53:07 - AP
染まるか染まらないかで言えばどちらか一方でも、あるいはどちらもしなくても染まる。
ただ、染色条件を同じにしても染まり具合が違ったり、ムラがあったりする。
定量的に染めようとするなら、染色が飽和していなければ、比較できないし再現性も安定しないだろう。それを避けるのには十全な浸透性を担保しなければならない、そういうことではなかろうか。
エタノール固定とTriton X-100による透過処理について
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No.5276-1 - 2016/07/26 (火) 17:42:27 -
nisu
細胞のDNAの含有量を調べています。細胞の中にPIを導入するための膜処理をするときプロトコルによると、エタノール固定とTriton X-100による透過処理の二つを行うように書いています。エタノール固定だけでも細胞膜に穴が開きPIが中に入り込む訳ではないのでしょうか?Triton X-100も必要な理由をご教授いただけないでしょうか?
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