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(無題) 削除/引用 No.5266-5 - 2016/07/22 (金) 14:47:53 - おお 粘性も考慮にいれるべきだろうけど、比重も考えないといけないのでは。

(無題) 削除/引用 No.5266-4 - 2016/07/22 (金) 13:08:23 - toto タンパク質のエタ沈は収率が悪い場合が多いです。いろんな方法がありますが、試した中ではクロロホルム・メタノール沈殿がベストでした。 Anal. Biochem(1984) 138, 141–143です。相分離を使うので、薄くても沈殿できる優れものです。今でもたまに使ってます。

塩析ですと 削除/引用 No.5266-3 - 2016/07/22 (金) 11:32:28 - ema 粗抽出にタンパクを塩析してましたが、落ちるには十分な遠心速度だと思います。 エタノールを入れて白く濁るは変性しているのでしょうが、落ちるような工夫をされていますか？どうしても塩を入れたくないなら超遠心レベルになると思います。 ＞やや粘性があるため 粘性があれば長時間になります。 問題ない範囲で溶液の組成、作業手順を公開した方が有益なアドバイスが集まると思います。

(無題) 削除/引用 No.5266-2 - 2016/07/21 (木) 17:10:09 - AP エタノールで沈殿させることに意味のある実験なのでしょうか。 タンパク質を沈殿させて回収する方法としてはTCAとかアセトンとか他に選択肢もありそうですが。

タンパク質エタ沈の遠心加速度 削除/引用 No.5266-1 - 2016/07/21 (木) 17:06:23 - 実験初心者 質問させていただきます。 現在とあるタンパク質（50〜500kDa程度）をエタ沈で回収する実験を行っています。 タンパク質溶液にエタノールを加え、溶液が白濁したら遠心にかけて 沈殿したタンパク知るを回収する、という操作を行っているのですが どうもうまく沈殿として落ちてくれません。 1.5mLチューブ使用で、チューブに500µLずつ加え20，000×g,30分行いましたがあまり落ちません。 上清の色がやや白濁が残っているためまだ沈殿として落ちそうな気もするのですが、これは遠心時間が短すぎるのでしょうか？ タンパク質の実験はあまり行ったことがないので、一般的な設定値などが わからず自分で調べてみたところ、15,000×gで15〜30分もあれば落ちる、 というのを見たのですが... 溶液はやや粘性があるため（グリセリンよりやや緩いくらい）、落ちにくいのかなとも思ったり。 どなたか知恵をお貸しください。

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