BioTechnicalフォーラム [免沈後、どのようにしてビーズを吸わないようにするか]

免沈後、どのようにしてビーズを吸わないようにするか

No.5263-TOPIC - 2016/07/21 (木) 11:13:25 - y

免沈を初めて間もないyと申します。
免沈自体はうまくいっており、アイソタイプでは落ちてきません。

早速の質問で恐縮しておりますが、免沈後、ビーズを洗浄し、1xSDSサンプルバッファー45マイクロリットル加えて、95度5分ボイルしますが、その後の15000g、5分遠心で上清を回収する際にビーズが少し混入してきます。

非常に貴重なサンプルから免沈しているので、ボイル後はできるだけ沢山のサンプルを回収し、その全てをSDSページしたいんです。

ビーズが混入していそうな場合には、サンプル上清を更に15000g、５分遠心して、その上清をSDSページしますが、その際ビーズがウェルに混入しないよう5マイクロリットルほど残して、アプライしています。

これをできれば全てアプライしたいんです。
何かいい方法ありませんでしょうか？私自身、ビーズがSDSページに混入することで何か不都合があるのかどうか、そもそも知りません。多少ウェルに混入しても問題ないのでしょうか？

非常に初心者的な質問で恐縮していますが、宜しくお願いします。
　

- このトピックにメッセージを投稿する -

全9件 ( 1 ～ 9 )　前 | 次　1/ 1. /1

IP乙

削除/引用

No.5263-9 - 2016/07/23 (土) 02:09:28 - qうぇrちゅいおp

磁気ビーズどうよ。ビーズは壁に強固にくっつくので、安心して溶出液を回収できるし、遠心なしでできるからコンタミナントの混入もかなり減らせるし、totalの時間も短くて済むし。

(無題)

削除/引用

No.5263-8 - 2016/07/22 (金) 05:59:58 - おお

>カラムベースのRNA抽出キットによくついてくる、filter column、余っていませんか？

実はいろいろそういう余ったやつを利用してます。素材がよくわからないので、物によってはどうかなと色々思うところもあります。ガラスだったら吸着もあるかもしれないので塩濃度少し上げたほうがいいんじゃないかとか、、、使えそうだけど悩むんですよね。
G50詰めてDNAやRNA合成したあとの未重合のものを除くとかにも使ったりしてます。

(無題)

削除/引用

No.5263-7 - 2016/07/22 (金) 00:19:35 - 横

え、免疫沈降後のビーズって再利用されるんですか？

(無題)

削除/引用

No.5263-6 - 2016/07/21 (木) 22:57:40 - かんちゃん

カラムベースのRNA抽出キットによくついてくる、filter column、余っていませんか？
ビーズを再利用しないのであれば、filter columnを使えばeluateとbeadsをより厳密に分けることができます。

(無題)

削除/引用

No.5263-5 - 2016/07/21 (木) 17:21:13 - MP

ビーズがウェルにはいっても特に問題を感じたことはないです。