いつもお世話になっています。今回もよろしくお願いします。
現在BACプラスミドのFISHを立ち上げているのですが、目的の細胞だけシグナルが検出出来ていません。
原因解明のため以下の4枚を同時にFISHしました。
1.コントロールとしてシグナルが出るとわかっている固定細胞でテロメアプローブ
2.1と同じ固定細胞でBACを用いたFISH
3.目的の培養細胞を1と同じように固定したものでテロメアプローブ
4.3と同じ細胞でBACFISH
すると1.2.だけシグナルが検出され、3.4は核染色しか染まりませんでした。
ちなみに細胞の動物種は同じで組織が異なっています。
以上の結果からプローブに問題はないと考えられるのですが、何がいけないのでしょうか？
自分としてはディネイチャーの可能性があると思ったのですが、細胞によって変化するようなものでしょうか？ディネイチャーは70%ホルムアミド2×SSC中で70℃2分行っています。
皆さんの考えと解決策を教えてください。宜しくお願い致します。 |
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