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嫌気条件下でT7プロモーターが効かない理由。 トピック削除
No.5178-TOPIC - 2016/06/23 (木) 14:35:03 - とおます
いつもお世話になっております。

大腸菌を用いて、嫌気下でタンパクの大量発現を行う予定です。
発現論文を読んでいると、T7プロモーターは嫌気下では機能しないので、
他のプロモーターに変えないといけないと書かれていましたが、
その理由がよく分かりませんでした。
ご存知の方、いらっしゃいませんか。

また、嫌気下で大量発現を行った経験のある方、
好気下条件と比べて気をつけた方がいい点等ありましたら、
アドバイス頂けましたら有難いです。

どうぞ宜しくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.5178-5 - 2016/06/28 (火) 17:58:57 - とおます
>おいおい、methodのConstruction of anaerobic expression vectorsに参考文献へのリンクがありまっせ!!

あ‥‥!
すみません、見落としてました。
ご指摘有難うございます。
ホント、赤面の至りです。。

>私の経験上、T7で大丈夫でした。と言っても説得力がないと思うので、
T7でヒドロゲナーゼを嫌気条件で発現させている参考文献を挙げておきましょう。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2991362/

ご親切に有難うございます。
早速読んで、勉強してみます!

(無題) 削除/引用
No.5178-4 - 2016/06/28 (火) 17:09:54 - WInter-8
>と書かれているのですが、参考文献も引かれておらず、
おいおい、methodのConstruction of anaerobic expression vectorsに参考文献へのリンクがありまっせ!!

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/2057350
流し読みしたものの、T7が機能しないという直接的な言い回しはないような...

私の経験上、T7で大丈夫でした。と言っても説得力がないと思うので、
T7でヒドロゲナーゼを嫌気条件で発現させている参考文献を挙げておきましょう。
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2991362/

(無題) 削除/引用
No.5178-3 - 2016/06/28 (火) 16:02:53 - とおます
ご返信有難うございます。

発現論文は以下の通りです。

PLoS One. 2010 May 6;5(5):e10526.
Sun J, Hopkins RC, Jenney FE, McTernan PM, Adams MW.

Result項目の3段落8行目に、

"Since the standard T7 promoter does not function in E. coli under anaerobic conditions, four different promoters were investigated for anaerobic heterologous expression of the Pf genes in E. coli."

と書かれているのですが、参考文献も引かれておらず、
理由がよく分かりませんでした。

(無題) 削除/引用
No.5178-2 - 2016/06/28 (火) 15:42:51 - WInter-8
嫌気下でも問題ないはずですが。
さしつかえなければ、その論文を教えていただけませんか?

嫌気条件下でT7プロモーターが効かない理由。 削除/引用
No.5178-1 - 2016/06/23 (木) 14:35:03 - とおます
いつもお世話になっております。

大腸菌を用いて、嫌気下でタンパクの大量発現を行う予定です。
発現論文を読んでいると、T7プロモーターは嫌気下では機能しないので、
他のプロモーターに変えないといけないと書かれていましたが、
その理由がよく分かりませんでした。
ご存知の方、いらっしゃいませんか。

また、嫌気下で大量発現を行った経験のある方、
好気下条件と比べて気をつけた方がいい点等ありましたら、
アドバイス頂けましたら有難いです。

どうぞ宜しくお願い致します。

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