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(無題) 削除/引用 No.5131-3 - 2016/06/05 (日) 17:03:25 - おお ドボンと漬けてそのまま放置プレーですね。

(無題) 削除/引用 No.5131-2 - 2016/06/05 (日) 15:48:25 - mon 細胞の染みこんだ？濾紙をそのまま、24wellに入れて、血清入り培地を上から注ぐだけです。培地量は多めが良いです。 予め培地をwellに入れておいても良いですが、濾紙が浮いたときはピンセットで沈めると良いです。 翌日〜2日後培地を吸引して濾紙を捨てるか、濾紙はそのままにして培地だけを交換します。 一度は、コロニーになっていないシート状細胞で練習すると良いです。

安定発現株作製時のクローニング手法に関して 削除/引用 No.5131-1 - 2016/06/05 (日) 15:14:30 - べたっと 平素は大変お世話になっております。 がん細胞株にプラスミドをトランスフェクトし、Puromycinにて安定発現株細胞を樹立しようとしています。 細胞がべたーっとしており、ピペットのチップでカキカキしてコロニーのピッキングは難しそうです。そこでクローニングシリンダーなるものいん興味を持っています。 ただ、ラボがカツカツなので、ろ紙をトリプシンで浸して、それをコロニー上にぺとっと貼り付ける方法でのコロニーピッキングを考えています。 質問ですが、ろ紙からどのようにして細胞を回収すればいいのでしょうか？ 24-well dishなどにろしをtransferするだけでいいでしょうか？それともろ紙をこなごなに砕いて、とか遠心してろ紙を沈めた上でその上清をtransferする、とか。。 コメントいただけますと幸甚です。

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