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タンパク質にDNAをコンジュゲートする方法 トピック削除
No.5106-TOPIC - 2016/05/28 (土) 12:17:26 - ぽん太
いつも勉強させていただいております。
この度あるタンパク質にDNAプライマーをコンジュゲートさせることを考えております。
現在考えている方法としてはタンパク質にアビジンをコンジュゲートし、ビオチン化DNAとインキュベーションする方法、あるいはSNAPタグを融合させたタンパク質を精製し、ベンゾグアニン化プライマーとインキュベートし結合させる方法を考えております。
この他に簡便かつ効率のよい方法はありますでしょうか?
どなたか詳しい方がいらっしゃいましたら教えて頂けると大変助かります。

タンパク質にSNAPタグをつけるなど、タンパク質側に細工をする方法もOKです。
どうぞよろしくお願いいたします。

ぽん太
 
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(無題) 削除/引用
No.5106-5 - 2016/06/02 (木) 10:59:20 - AP
>5'末端をアミノ化したDNAを合成してもらってWSCなりHDIなりでくっつけてみるとか

塩基にアミノ基をもつものがあるので(T以外全部)、それらにも結合してプライマーとして機能しないんじゃないか?

(無題) 削除/引用
No.5106-4 - 2016/06/02 (木) 10:40:23 - おお
mbbさんと同じようにおもっていた者です。メーカーによってバリエーションがありますが、リン酸基にアミノ基やSH基をもったものを導入したものなどを合成してくれるところがあります。それを利用すると蛋白同士のクロスリンクが可能になりますけど、クロスリンクはみずものというかいい条件が見つかるときもあるだろうし、くっつけると蛋白に影響が出るときもあるだろうし、なかなか効率よくつけれないこともあるだろうし。。。と思うところがありまして、ビオチン化のほうが確実なんじゃないかなあとおもい発現しませんでした。

リン酸基への導入は試薬さえあればご自身でもできるかと思いますが、そこからやろうとすると最初のリン酸基への導入の効率とか検討することが多くなりますので、もしやるならカスタム合成依頼に頼ったほうがいいと思います。

(無題) 削除/引用
No.5106-3 - 2016/06/01 (水) 22:44:13 - ぽん太
mbb様
その方法は知りませんでした。
有難うございます!

(無題) 削除/引用
No.5106-2 - 2016/05/28 (土) 14:41:05 - mbb
5'末端をアミノ化したDNAを合成してもらって
WSCなりHDIなりでくっつけてみるとか、色々
やりかたはあると思います。
コンジュゲートを作成する際は、スペーサーを
それなりに入れたほうが良いんじゃないかと
思います。

タンパク質にDNAをコンジュゲートする方法 削除/引用
No.5106-1 - 2016/05/28 (土) 12:17:26 - ぽん太
いつも勉強させていただいております。
この度あるタンパク質にDNAプライマーをコンジュゲートさせることを考えております。
現在考えている方法としてはタンパク質にアビジンをコンジュゲートし、ビオチン化DNAとインキュベーションする方法、あるいはSNAPタグを融合させたタンパク質を精製し、ベンゾグアニン化プライマーとインキュベートし結合させる方法を考えております。
この他に簡便かつ効率のよい方法はありますでしょうか?
どなたか詳しい方がいらっしゃいましたら教えて頂けると大変助かります。

タンパク質にSNAPタグをつけるなど、タンパク質側に細工をする方法もOKです。
どうぞよろしくお願いいたします。

ぽん太

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