全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.5100-5 - 2016/05/27 (金) 08:00:35 - おお ならばリガンドの膜透過性も問題になるのでは？ライセートで一度やってみてつくようだったら細胞内にはいってないと考察できるんじゃないかな。

(無題) 削除/引用 No.5100-4 - 2016/05/27 (金) 07:38:02 - hi おおさんありがとうございます。 biotinによる立体障害は考えていませんでした。 受容体は膜局在ではなく主に細胞質に存在するので厄介なんですよね。

(無題) 削除/引用 No.5100-3 - 2016/05/27 (金) 04:11:02 - おお 受容体は膜局在かな。。。そうでなければ、考えないといけないパラメーターが増えるかも

(無題) 削除/引用 No.5100-2 - 2016/05/27 (金) 01:10:10 - おお biotinにより立体障害とか、架橋がうまく行ってないとか、、、

共沈降について 削除/引用 No.5100-1 - 2016/05/27 (金) 00:33:16 - hi いつも勉強させていただいています。 ある受容体タンパクXのリガンドをbiotin標識しましてmonomeric avidinを用いて 共沈降させタンパクXと相互作用しているタンパクをウエスタンで解析しようとしています。 しかしながら上清でタンパクXの発現は確認できているものの、ペレットでは確認できていません。biotin標識および、biotin標識リガンドを用いたタンパクXの発現は確認できています。何が原因なのでしょうか？ プロトコルは以下のように行なっています。 �@biotin標識リガンドを細胞に添加and受容体と架橋させる �APBS wash �BRIPA buffer(in protease inhibitor)添加→5min インキュベート後回収 →遠心15000rpm 10min �C上清回収後、monomeric avidinを上清に添加→4℃ 8時間ローテート �D5000rpm,5minで遠心後 RIPAでwash twice→PBS wash once �Eレムリーに溶かす

全5件 ( 1 〜 5 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---