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(無題) 削除/引用 No.5089-7 - 2016/05/23 (月) 17:48:33 - べき みなさま、ありがとうございます。 長時間の培養には炭酸を抜いた培地がよろしいようですね。 GIBCOの培地など検討してみたいと思います。ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.5089-6 - 2016/05/23 (月) 16:35:51 - おお http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4198327/ 単純に炭酸バッファー以外を使えばいいと書きましたが調査すれば、炭酸はpH以外の役割もあると書かれてるものも結構あるので、重曹を減らしてHEPESを加えるというのもうなずけますね。 細胞次第でしょうけど、炭酸全くなしでもL-15とかで１０時間位持つ細胞はあるようです。ただし分裂をしないとか色々制約も出て来るみたいですけど。セットアップがてらにある程度は手探りになるかもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.5089-5 - 2016/05/23 (月) 16:14:29 - おお まあ理屈はかんたんで、炭酸系のバッファーを使わないで、その他のバッファー系にすればいいんだと思います。L-15はリン酸系だったと思いますが、重炭酸をあとで加える培地もありますので、それでバッファー系を変えれば早いでしょうけど、Live imagingなんて何年もやられてるのだから、調査してみるといいかとおもいますよ。L-15はたしかにHEKとかよく使う飼いならされた細胞で使っているのをよくみます。ある施設で樹立されたがん細胞は最初からL-15で飼って樹立しているようなものもありますね。神経細胞とかどうやってるんでしょうかねぇ。 https://www.thermofisher.com/us/en/home/life-science/cell-analysis/cellular-imaging/fluorescence-microscopy-and-immunofluorescence-if/microscopy-reagents-and-media/live-cell-imaging-reagents.html http://jcs.biologists.org/content/122/6/753

(無題) 削除/引用 No.5089-4 - 2016/05/23 (月) 15:55:42 - toto L-15は多くの培養細胞には厳しいと思います。大抵はすぐに死んでしまいます。ただ、時間かけて徐々に飼い慣らせば良いのかもしれません。 確か、GIBCOのCO2independent培地は何日でもCO2無しで培養できたはずです。DMEMでCO2がないとpHが維持できないのは、重曹を使う緩衝系にしているからで、GIBCOのこの培地の組成が公開されていませんが、おそらく重曹を減らしてHCO3-に依存しない緩衝系にしてると思います。 昔、MEMの変法で重曹を減らした培地が出ていました（普通は2.2ｇ／Lのところを350mg/L、それに伴って他の塩の組成も若干変わります）。生理学で用いられていた培地で、これを使うと大気中で37度にして普通に培養して継代もできます。作るのは可能ですが面倒なので、GIBCOから買った方が早いです。

(無題) 削除/引用 No.5089-3 - 2016/05/23 (月) 13:37:22 - サンショウウオ HEPES EPPS MESを1:1:1で混合した水溶液（pHは適宜調製してください）を、終濃度20mMになるようにRPMIやDMEMに添加すれば、CO2が有ってもなくても1時間ぐらいはpHが維持できた経験があります。

(無題) 削除/引用 No.5089-2 - 2016/05/23 (月) 13:23:04 - おお L-15など、CO2非依存的にpHを調整している培地があります。またGIBCOにpHが比較的安定というウリで新しい商品が出てたような気がします（６時間はどうだろう。。。）。通常の培地はHEPES入っていても数分でだめでしょう。

ライブイメージング時のCO2 削除/引用 No.5089-1 - 2016/05/23 (月) 12:38:53 - べき 哺乳類培養細胞のGFPのライブイメージングを計画しております。 顕微鏡とステージチャンバーは用意できるのですが、CO2のボンベやレギュレーターなどを用意するのが難しそうです。 そのため培地に20mM HEPES 7.4を加えて、37度でCO2の調節なしで行うと考えております。6時間ほど、もしくはそれ以上は撮影したいと考えております。 実際に5%CO2で行う場合と比べて、HEPESでpH調節だけを行う場合でのライブイメージングは何時間ぐらいまで行えるものでしょうか？ よろしくお願いします。

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