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(無題) 削除/引用 No.5055-3 - 2016/05/17 (火) 18:41:57 - Rd 教えていただきありがとうございます。 GenScriptに依頼したところ、すぐにコドン最適化の結果が送られてきました。 実際に注文するかどうかを検討してみます。

(無題) 削除/引用 No.5055-2 - 2016/05/11 (水) 13:12:11 - mon GenScriptで2-3kbほどの遺伝子を数10個合成依頼したことがあります。 アメリカが本社で合成は中国で行っています。 Codon optimizationの際に除外する制限酵素部位を複数指定しました。見積もりと予定配列のデータ(英語）を送ってくれるので、再度じっくり検討してください。予定配列は中国の技術者が作製するようです。 自分の場合は、同じアミノ酸配列を誤って2つ加えていたら指摘してもらえましたが、多数注文する場合は再度の確認を行いましょう（自戒）。 担当者が中国の方(phD保持者）でメールの日本語が多少おかしい時がありますが、対応は丁寧で早いです。もちろん日本語での会話は問題ありません。 ＞全長は大きいので分節で作って後で繋ぐ予定です。 手間はかかりますが、コスト的にも、後で変異を入れる場合も楽なので良い考えだと思います。 いろいろなベクターに入れることを考えて、Esp3I やBsaIなどの制限酵素を付加し切断部位が残らないように連結する方法もご検討ください。 37℃で反応させる酵素（Esp3I やNEBのBsaI-HF）なら切断とligationが同時にできます。 CutSamrt buffer+T4 Ligase buffer(or +DTT+1mM ATP)+5% PEG6000で、22℃ 1時間反応でコロニー数が最大でした。

お勧めの人工DNA合成 削除/引用 No.5055-1 - 2016/05/11 (水) 11:13:28 - Rd お世話になっております。 哺乳類由来培養細胞(ヒトあるいはマウス)で、発現プラスミドを用いて12000塩基程度の遺伝子を発現させたいと考えています。 蛋白発現効率を良くするためCodon optimizationを行い、全配列の人工DNA合成を依頼しようと考えています。全長は大きいので分節で作って後で繋ぐ予定です。 人工DNA合成を行っている業者がいくつかあるようですが、精度と価格という点においてお勧めのところをご存知でしたら教授いただけると幸いです。 (日本国内在住です。コストはトータル５０万円以下が望ましいです) 価格で考えるとGenScriptが考えられますが、この会社のDNA合成を利用したことがある方、ご感想など教えていただけると幸いです。

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