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(無題) 削除/引用 No.4974-5 - 2016/04/11 (月) 14:37:52 - 定量性 返信をありがとうございました。 自分の方法でもそれほど問題はないのですね。 メンブレンの水分をあらかじめ切るという点は気をつけたいと思います。 箱に反応液を入れてシェイクする方法も試してみるつもりです。 ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4974-4 - 2016/04/10 (日) 21:42:51 - B型 ラップ引いて2~4mlを３カ所くらいに分けて滴下して転写面を下（伏せるように）に向けて置きます。液量も少なくてすむし、反応液が一瞬で均一に膜全体に広がるのでムラがなく、また乾燥も避けられるのでいいかんじで結果えられます。 膜を置く前に膜を振ってbuffer を軽く水切りして下さい。 ピンセットでつまんでますが特に黒くなりません。きれいなものを使えばたぶん大丈夫とおもいます。

(無題) 削除/引用 No.4974-3 - 2016/04/07 (木) 04:56:11 - しろ うちではTBSTで最後の洗浄を終えたメンブレンの箱からTBSTを捨て、ミックスした反応液をそのメンブレンの上に入れて箱をシェイクして反応させています。ピンセットは、以前つかんだところのバックグラウンドが黒く出てしまったことがあったので、ピンセットの先にテープをつけて使っています。（つかみづらいです。）私も以前定量性さんの方法でやっていたときもありましたが、点々と置くのが面倒なのとうまく膜を乗せられずに空気が入ってしまいあわてた経験もあるので今はこのようにシンプルにやるようになりました。定量性さんの方法でやっている方も見ますよ。

(無題) 削除/引用 No.4974-2 - 2016/04/06 (水) 18:38:11 - おお 私は揺するよりも、ピンセットでアップダウンさせてますけどね。心配はわかりますけど１mlの水玉にそーと載せるとミニゲルなら濃度の変化を気にせずに全体に行き渡るほどの量あるような気がしますけど、 とうしても気になるなら、メンブレンの上に全体に行き渡るように、一滴ずついろいろな場所に落として言ってもいいかもしれません。メンブレンの水分を軽く切るためにペーパータオルの上に載せたり、メンブレンの角をつけたりしてから、ECLミックスに付ける人もいるようです。

Western blottingでの発光基質の添加方法 削除/引用 No.4974-1 - 2016/04/06 (水) 17:27:40 - 定量性 WBで定量性を高める試みをしています。 HRP標識の二次抗体を反応させた後で、基質を添加して検出しているのですが、自分の方法がイマイチな気がしています。 具体的には、 ・ThermoのSuperSignal West Duraの2つの試薬を500 µlずつミックスする。 ・1枚のメンブンレンに対して上記の試薬ミックスを1 ml添加する。 ・クリアポケットの上に試薬ミックスを点々と置き、メンブレンを乗せてピンセットでゆすって反応させる。 という方法をとっています。 ただ、この方法だと、点々と置いた試薬ミックスにダイレクトに当たった箇所と、ゆすっているうちに当たった箇所で濃さが違ってしまうのではないかと思いました。 おすすめのやり方を教えていただけますでしょうか。

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