Bio Technical フォーラム

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WBのバンドが一瞬しか出ない トピック削除
No.4960-TOPIC - 2016/04/02 (土) 07:16:12 - Houston
WBで最近続いているトラブルについての相談です。
標準的な方法でWBを行い、ECL(Supersignal west pico)を乗っけてフィルムを現像しているのですが、一度10秒の露光でバンドが出たメンブレンを、その後引き続いて、30秒露光しても、5分露光してもバンドが出てきません。もう一度ECLを乗っけてみたのですが、やはり出ません。これが特に特定の抗体というわけでもなく、ここ最近何回か起こっており、原因が分からず困っております。どなたか原因がわかる方がおられたらアドバイスよろしくお願い致します。同時にやっている他のメンブレンは普通にうまくいっているのもあるので、WBの手技の部分ではないと思っているのですが、ECLが何かおかしくなっているのでしょうか?
 
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No.4960-5 - 2016/04/02 (土) 19:50:59 - Ano
フィルムでは無く、CCDカメラで撮影させてもらえるところに行ってみたら?

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No.4960-4 - 2016/04/02 (土) 11:40:46 - まっくろん
発光試薬が怪しいようなら、無料サンプル貰ってやれば出費もなくいいと思いますよ。パーキンエルマーとかサーモとかもらえた気がします。

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No.4960-3 - 2016/04/02 (土) 08:30:36 - おお
ECLのH2O2かそれに相当するものがヘタってきているか、2次抗体がヘタってきているんだとおもいます。

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No.4960-2 - 2016/04/02 (土) 07:33:54 - wet
標的タンパク質が濃すぎて基質の枯渇で白抜けになることはありますけど、複数の抗体でも起こるのなら違うかな。
10秒露光した後すぐ次の露光を開始するのか、現像してから露光を開始するのかでも基質の残存量は違いそうです。
メンブレンに茶色のバンド出てません?
あとは、誰かが試薬をとるときに同じピペット使ってコンタミさせちゃったとか。

WBのバンドが一瞬しか出ない 削除/引用
No.4960-1 - 2016/04/02 (土) 07:16:12 - Houston
WBで最近続いているトラブルについての相談です。
標準的な方法でWBを行い、ECL(Supersignal west pico)を乗っけてフィルムを現像しているのですが、一度10秒の露光でバンドが出たメンブレンを、その後引き続いて、30秒露光しても、5分露光してもバンドが出てきません。もう一度ECLを乗っけてみたのですが、やはり出ません。これが特に特定の抗体というわけでもなく、ここ最近何回か起こっており、原因が分からず困っております。どなたか原因がわかる方がおられたらアドバイスよろしくお願い致します。同時にやっている他のメンブレンは普通にうまくいっているのもあるので、WBの手技の部分ではないと思っているのですが、ECLが何かおかしくなっているのでしょうか?

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