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(無題) 削除/引用 No.4955-12 - 2016/04/01 (金) 12:41:53 - おお http://www.abcam.com/insulin-antibody-ab115199.html >Tested applicationsIHC-P, Flow Cyt, ICC/IF, ICC more details Anti-Insulin antibody フローサイトで使えるとしているAnti-Insulin antibodyがあるなぁ。。。

(無題) 削除/引用 No.4955-11 - 2016/04/01 (金) 12:19:38 - iso あーなるほど よく読むとタンパク質の検出をFACSでしようとしてるようにも読み取れる その場合は、ビーズで捕捉して測定する手法がありますね 4番目の返答から、細胞を使って本来見えないシグナルが見えたから、分泌タンパク質が細胞にくっついてると考えて質問したのだと思った トピ主が消えたので真意はわからないけど

(無題) 削除/引用 No.4955-10 - 2016/04/01 (金) 11:51:15 - たぶん 無理です。だって、たとえばFITC−抗体でインシュリンを捕まえても、それは通常の操作では、沈殿する細胞画分に来ないで、除去されてしまうからです。 普通の実験過程で未結合のFITC−抗体（さらにはFITC−抗体ーインシュリン）とかは積極的に除去されるべきものですよね。FCの超専門家なら、できるかどうか厳密に判断できるかもしれません。ただ、蛋白レベルでのFCって聞いたことがない。

(無題) 削除/引用 No.4955-9 - 2016/04/01 (金) 10:20:50 - おお 分泌する蛋白でも、物によってはスプライシングやプロセッシングの違いなどで膜にとどまるような場合もありますね。 検出と言うのは抗体などでラベルしてということなんでしょうか？ 分泌されて溶液中のものを検出するという事なのでしょうか、それとも細胞上でということなのでしょうか。。。 色々と回答がでてますが、みなさん違う視点で回答されていますので、、、

(無題) 削除/引用 No.4955-8 - 2016/03/31 (木) 08:06:40 - TOKIO virusぐらいまで大きくなると検出出来るようです。 https://www.jci.org/articles/view/67042 蛋白は難しいかも知れません。

(無題) 削除/引用 No.4955-7 - 2016/03/30 (水) 11:06:45 - iso 膜透過処理をしているかどうかで話はかわる あとは単なるノンスペ

(無題) 削除/引用 No.4955-6 - 2016/03/30 (水) 10:31:10 - おお まあ、分泌されるといっても膜上にはマトリックス成分もあるだろうし、電荷も持っているだろうし、程度はあるにしても分泌淡白が細胞表面に親和性があるという想像は容易にできるのだけど。。。

(無題) 削除/引用 No.4955-5 - 2016/03/30 (水) 09:16:20 - 独り言 タンパク質自体をFACSで検出するのは、現在の機械ではほぼ無理です。小さすぎるからです。ゴミや細胞の破片とも区別できないでしょうし。 最近やっと、オルガネラぐらいの大きさでも検出できるよういなってきたんじゃないかな。 そもそも、細胞をFACSするときはFSCとSSCで選択しているはずなので、タンパク質だけの物体のシグナルがコンタミすることはないと思います。

(無題) 削除/引用 No.4955-4 - 2016/03/30 (水) 09:07:16 - FACS+初心者 TK1様、CD様 ご解答有難うございます。私は、分泌小砲をFACSで見ることを目的としているのではなくて、インスリンなどの分泌されるタンパクが検出されるかどうかを知りたかったのです。 今まで、細胞膜に存在すると報告されていないタンパクがなぜかFACSでかなり検出されます。かといって、細胞膜にとどまっていれるような特有の配列もないので、もしかしたら、細胞外へ分泌されるタンパクなのでFACSで検出されたのかな？と考えていましたが、分泌タンパクははたしてこんなにしっかりと検出されるのだろうか？と疑問に思って質問させていただきました。

(無題) 削除/引用 No.4955-3 - 2016/03/30 (水) 05:27:46 - CD β細胞を使ったこと無いので詳しくはわかりませんが、インスリンを染色したいのであればゴルジ止める必要無いような気がします。理由の1つはインスリンは基本的には刺激依存性に放出されるから。少なくとも実験動物の膵島を取ってきてそのままインスリンを見たいのであればグルコールリッチなメディウムにつけないかぎりインスリンは放出しないんじゃないかなあと。 ちょっとググるとインスリンをFlow cytoで見ている論文たくさんあるので、真似してはいかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4955-2 - 2016/03/30 (水) 03:47:05 - TK-1 いわゆるGolgi stopやGolgi Plugといったvesicular traffickingを阻害する物質の存在下で細胞膜をpermeabilized することによって検出できるものもあります。サイトカインの多くはこういった処理をして検出することが多いです。欠点は細胞を固定しないといけないのでライブセルでは見れないことです。別の方法としてはcapture antibodyを使う方法もあります。この場合は固定の必要はありません。cytokine capture assayで検索すればそれなりの情報は得られると思います。

分泌淡白のFACS 削除/引用 No.4955-1 - 2016/03/30 (水) 00:50:35 - FACS 初心者 FACSのことで質問させてください。 例えば、インスリンなどの細胞外へ分泌される淡白などは、FACSでも検出されるのでしょうか? 分泌小砲から、細胞外へ分泌され膜にとどまることはないように思えるので検出できても、検出力が弱いような気がしてしまうのですが、素人質問ですいません。 教えていただけないでしょうか。

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