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(無題) 削除/引用 No.4951-8 - 2016/03/27 (日) 09:29:31 - おお ＞先輩から５つの大腸菌ラインからプラスミドをプレップ そのリスクをその先輩が理解したうえで、それでいいというならやればいいのかなと思いますが、ちゃんと取れなかったときキットのせいじゃなくお前のせいだとなると、不利な立場にもなります。よく相談してください。

(無題) 削除/引用 No.4951-7 - 2016/03/27 (日) 09:27:39 - おお この手のゲルのタイプはシリカとイオン交換がありますシリカは水やＴＥなど低イオン強度でＤＮＡが溶出されますが、イオン交換は高い塩濃度で溶出するようになっています。 ゲルの素材の性質に合っていれば理論的に吸着、溶出はほぼ同様にできるでしょう。ただし、ターゲットによってゲルなどの加工を施したり変更している可能性がありますので、収量や精製度に関して１００％の保障はないと考えるべきかとおもいました。 ラフに考えて、まあ取れるでしょう。

(無題) 削除/引用 No.4951-6 - 2016/03/26 (土) 15:27:56 - 咲良 おおさん、ありがとうございます!! bufferはすべてmidiprep用のものを用いて、最後のカラムだけ、genomic-tip 100/Gを用いることができるのではないか？というのが質問だったんです。 そうですね、確かに添付のbufferを用いるとゲノムが優先的に取れてしまうかもしれないですね。

(無題) 削除/引用 No.4951-5 - 2016/03/26 (土) 15:18:26 - おお とれるかもしれないけど、収量とかバッファーなど非常に長いDNAに特化しているかもしれないので、ゲノムにくらべてはるかに小さいプラスミドは流れ落ちるような条件や塩濃度になってないかちょっと気になる。

(無題) 削除/引用 No.4951-4 - 2016/03/26 (土) 15:00:17 - 咲良 monさん、早速お返事いただきまして、誠にありがとうございます!! monさんがおっしゃるように、bufferを先ほど見ていたらNaClなど、midiprepでは使わないbufferがあったので、bufferだけが異なるのかもしれませんね。お聞きしてよかったです。 ただ、随分古そうですが笑 ありがとうございました!!

(無題) 削除/引用 No.4951-3 - 2016/03/26 (土) 14:35:11 - mon おそらく問題なく使えるでしょう。用途によって精製用bufferが異なるだけだと思いますよ。 カラムの大きさが不明ですが、DNA結合担体（イオン交換カラム樹脂）は同じモノを使用していると思います。もしかすると粒子（穴？）の大きさが異なるかもしれません。 メーカーとしては、開発費や制作費（材料費）を考えれば、同じモノを使いました方が原価が安くなりますし。

MidiprepにQIAGEN Genomic-tip 100/Gの代用 削除/引用 No.4951-1 - 2016/03/26 (土) 14:06:55 - 咲良 おはようございます。困った学生をしていますが、今朝から教わっている先輩から５つの大腸菌ラインからプラスミドをプレップするようにとのことなので、今そのセットアップをしているところです。 キアゲンの箱を見たらいつもの大腸菌培養液100ml用のカラムの在庫がゼロでした。 今日は一旦、大腸菌の沈殿物を凍らせて、発注したものが届き次第、Midiprepしようと思っています。 質問というか興味なのですが、QIAGEN Genomic-tip 100/Gというカラムが沢山あることに気付きました。以前研究室の方が、それで間違えてMidiprepをしたけど、きちんとプラスミドが取れて、トランスフェクションなどの用途に使えた、と言っていました。 これはゲノムを摂るものだと思いますが、ゲノムに限らず、プラスミドも採れるんだろうと思います。手順書通りMidiprepを行うと、P3を添加し、遠心した時点でゲノムは変性された状態で沈殿に来ていると思います。その上清には無傷なプラスミドがあるので、それをこのカラムにかけても問題なく採れるのでは？と逡巡しています。5つの先輩の大腸菌なので私がこのまま突き進むことはできませんが、後学のために、この解釈であっているのかどうかをお聞きしたくて質問させていただきました。初歩的な内容だと思いますが、宜しくお願いします。

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