Bio Technical フォーラム

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PFA固定→OCTコンパウンド→WAX?? トピック削除
No.495-TOPIC - 2012/05/08 (火) 21:37:41 - no name
皆様、教えて下さい。
先日、知人から胎生14日のマウス胚を
PFA固定した物をOCTコンパウンドに入れ、
ドライアイスで保存した状態で貰い受けました。

当然凍結切片にして染色…と言うのが通常なのでしょうが、
実は事情によりWax切片にできないかと考えています。

一度OCTコンパウンドに入れて凍結したサンプルを
PBSで数回洗浄→(PFAで再固定)→Wax包埋と言うのは無謀でしょうか?

無謀と言うのは重々承知ですが、
可能であれば試してみたいので、
可能かどうかご存知の方がいらっしゃれば、
教えて頂ければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.495-2 - 2012/05/09 (水) 10:07:20 - AP
やったことないですが、出来るんじゃないですか(無責任)?

凍った水分の、急速な融解、急速な置換は形態を損なう可能性があります。
染色体標本やホールマウントで、一旦スライドを凍結するステップがある方法からの演繹ですが、PBSで洗うより、フリーザーで冷やした95-99%エタノールに入れて、ゆっくり室温に戻しながら置換したらどうでしょうか。

心配でしたら、手持ちの材料でテストしてからやってみては。

PFA固定→OCTコンパウンド→WAX?? 削除/引用
No.495-1 - 2012/05/08 (火) 21:37:41 - no name
皆様、教えて下さい。
先日、知人から胎生14日のマウス胚を
PFA固定した物をOCTコンパウンドに入れ、
ドライアイスで保存した状態で貰い受けました。

当然凍結切片にして染色…と言うのが通常なのでしょうが、
実は事情によりWax切片にできないかと考えています。

一度OCTコンパウンドに入れて凍結したサンプルを
PBSで数回洗浄→(PFAで再固定)→Wax包埋と言うのは無謀でしょうか?

無謀と言うのは重々承知ですが、
可能であれば試してみたいので、
可能かどうかご存知の方がいらっしゃれば、
教えて頂ければ幸いです。

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